類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血輔助性T細(xì)胞亞群與樹突狀細(xì)胞的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、目的：
　　研究輔助T細(xì)胞亞群分化及其相關(guān)細(xì)胞因子對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病程的影響，探討樹突狀細(xì)胞亞群、SIRT1的表達(dá)與輔助性T細(xì)胞亞群分化的關(guān)系，進(jìn)一步闡明類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：
　　選取94例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和22例相匹配的健康體檢者作為正常對照組，將入選的RA患者根據(jù)疾病活動性評分(DAS28），分為低度活動期（DAS28≤3.2）、中度活動期組（3.25.1

2、）三個亞組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測所有受試者外周血淋巴細(xì)胞亞群、DCs(mDC、pDC)、Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞比例；RQ-PCR檢測外周血單個核細(xì)胞中RORγt、FoxP3及SIRT1 mRNA表達(dá)水平；ELISA檢測血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β，并分析其與DAS28以及實(shí)驗(yàn)室炎癥反應(yīng)指標(biāo)（ESR、hsCRP、RF、抗CCP抗體）的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1. RA組CD3+T淋

3、巴細(xì)胞的比例與正常對照組比較，差異無顯著性意義。而CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞水平及 CD4+/CD8+比值均高于正常對照組(p<0.05）， CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞低于正常對照組（p<0.05）；隨著RA患者DAS28活動度增加，CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值表現(xiàn)增高趨勢，但差異無顯著性意義（p>0.05）。
　　2.與正常對照組比較，RA組Th1、Th17細(xì)胞的百分率（p<0.05)RA高度活動期組Th17細(xì)胞升高最

4、明顯（p<0.001），而Th1細(xì)胞的百分率隨著 RA疾病進(jìn)展有增高的趨勢，但在 R A各活動期組間差異無顯著性意義（p>0.05）；Th2細(xì)胞（p>0.05)RATre g（p<0.001)Th1/Th2 RA差異無顯著性意義（p>0.05）在RA高度活動期組Th17/Tre g比值明顯升高（p<0.001），其他各組間差異無顯著性意義（p>0.05）。相關(guān)分析顯示Th17/Treg比值與ESR、hsCRP、DAS28活動指數(shù)均呈顯著

5、正相關(guān)（p<0.05）， RA患者外周血Th1/Th2與Th17/Tre g呈負(fù)相關(guān)（p<0.05）。
　　3.RA高度活動期組的RORγt mRNA表達(dá)升高（p<0.05），F(xiàn)oxP3 mRNA表達(dá)降低（p<0.05），而在其他各組間差異無顯著性意義（p>0.05）。
　　4.與正常對照組比較，RA組外周血血清中 IFN-γ、IL-17的表達(dá)水平（p<0.05)IFN-γ RA高度活動期組升高最明顯（p<0.001），IL

6、-17隨著DAS28活動度增加表現(xiàn)逐漸升高；IL-4水平 RA中度、高度活動期組明顯降低（p<0.001）； TGF-β水平在RA低度、中度活動期組明顯降低（p<0.01）則升高（p<0.05)IFN-γ/IL-4比值在RA組明顯高于正常對照組（p<0.01）隨著DAS28活動度增加表現(xiàn)逐漸升高。相關(guān)分析顯示RA患者血清中IL-17、TGF-β的表達(dá)水平與ESR、hsCRP、DAS28活動指數(shù)均呈顯著正相關(guān)（p<0.05）。
　　

7、5. RA高度活動期組外周血 mDC的表達(dá)水平明顯降低（p<0.01），其他各組間差異無顯著性意義（p>0.05）；RA組的pDC的表達(dá)水平明顯低于正常對照組（p<0.001），pDC RA高度活動期組降低最明顯；RA組mDC/pDC的比值高于正常對照組（p<0.05），而其在RA各活動期組間差異無顯著性意義（p>0.05）。
　　6. RA患者外周血mDC水平與Th17、Th17/Treg比值、IFN-γ、IL-17呈負(fù)相關(guān)（p

8、<0.05）；外周血pDC水平與 Tre g呈正相關(guān)（p<0.05），而與 Th17/Tre g比值、IFN-γ、IL-17、TGF-β呈負(fù)相關(guān)（p<0.05）；mDC/p DC比值與 Th17、Tre g呈負(fù)相關(guān)（p<0.05）。
　　7.與低度、中度活動期RA患者和正常對照者相比，高度活動期R A患者外周血單個核細(xì)胞SIRT1 mRNA表達(dá)下調(diào)（p<0.05）；進(jìn)行相關(guān)分析顯示RA患者外周血單個核細(xì)胞SIRT1 mRNA表達(dá)水

9、平與Th1、Th1/Th2、IFN-γ、IL-17水平呈負(fù)相關(guān)（p<0.05），與Th2及RORγt、FoxP3 mRNA水平呈正相關(guān)（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. RA患者外周血存在Th1/Th2、Th17/Tre g失衡，尤以Th17/Tre g偏移為主，繼而導(dǎo)致促炎因子升高，促進(jìn)RA的發(fā)生、發(fā)展。
　　2. RA患者外周血存在DC亞群分化不平衡，可能對RA發(fā)病中Th17/Treg失衡和細(xì)胞因子微環(huán)境有一