室旁核血管緊張素Ⅱ在慢性間歇性低氧誘發(fā)大鼠高血壓中的作用及機(jī)制.pdf

1、背景
　　睡眠呼吸暫停綜合征（sleep apnea syndrome,SAS）與高血壓的關(guān)系甚為密切，慢性間歇性低氧（chronic intermittent hypoxia，CIH）是SAS的主要病理生理學(xué)特點(diǎn)和損傷機(jī)制，被認(rèn)為是引起高血壓最為重要的因素，CIH引起高血壓的發(fā)病機(jī)制可能與持續(xù)增強(qiáng)的交感神經(jīng)活動(dòng)有關(guān)。下丘腦室旁核（paraventricular nucleus,PVN）是整合心血管活動(dòng)的重要核團(tuán)，可以通過直接作用

2、于交感節(jié)前神經(jīng)元的突觸傳遞或間接通過作用于延髓頭端腹外側(cè)（rostral ventrolateral medulla，RVLM）影響交感神經(jīng)活動(dòng)。最近研究表明，PVN與CIH條件下持續(xù)增強(qiáng)的交感神經(jīng)活動(dòng)（sympathetic nerve activity,SNA）密切相關(guān)。腦內(nèi)血管緊張素Ⅱ（angiotensin II,AngⅡ）被認(rèn)為是腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system,RAS）家庭中的一員，調(diào)節(jié)

3、交感神經(jīng)活動(dòng)和動(dòng)脈血壓最重要的神經(jīng)遞質(zhì)之一，與各種高血壓的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。
　　目的：
　　1.探討PVN中AngⅡ在慢性間歇性低氧誘發(fā)高血壓中的作用及其機(jī)制。
　　2.觀察長期應(yīng)用AngⅡ的1型受體拮抗劑氯沙坦（losartan，LOS）對(duì)慢性間歇性低氧誘發(fā)高血壓的防治效果，為防治SAS誘發(fā)的合并癥提供依據(jù)。
　　方法：
　　將雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照（Sham）組和慢性間歇性低氧（CIH）組（每日8

4、 h，連續(xù)15d）。用無創(chuàng)套尾法測(cè)大鼠尾動(dòng)脈收縮壓（systolic blood pressure,SBP）和動(dòng)脈插管法記錄平均動(dòng)脈壓（mean arterial pressure,MAP），用立體定位儀進(jìn)行PVN核團(tuán)定位并微量注射藥物，用Western blot測(cè)定PVN中AngⅡ水平及AngⅡ1型受體（angiotensinⅡ type1 receptor，AT1R）蛋白表達(dá)。
　　1.慢性間歇性低氧對(duì)大鼠血壓的影響
　

5、　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成Sham組和CIH組，Sham組除不充入氮?dú)夂脱鯕馔?，其余均與CIH組做相同處理。通過氮?dú)庀♂屧恚瑓⒄瘴覀兿惹暗姆椒?，CIH組大鼠放入間歇性低氧艙內(nèi)，由測(cè)氧儀監(jiān)測(cè)間歇性低氧艙中的氧濃度，調(diào)節(jié)氣體流量，低氧艙內(nèi)氧濃度控制在6％~21%。向低氧艙循環(huán)充入氮?dú)夂脱鯕?，每一循環(huán)為9min，即4min充入氮?dú)?，艙?nèi)的最低氧濃度達(dá)到6%左右，持續(xù)時(shí)間為40s左右；隨之5min充入氧氣，使氧濃度再逐漸恢復(fù)至21%。該循環(huán)每天重復(fù)8

6、h（9:00am～5:00pm）共15d。通過軟件分析測(cè)SBP、MAP，并分析慢性間歇性低氧對(duì)大鼠SBP、MAP、心率（heart rate，HR）的影響。
　　2.CIH對(duì)大鼠PVN中AngⅡ水平和AT1R表達(dá)的影響
　　實(shí)驗(yàn)分為Sham組和CIH組,使用Western blot分別檢測(cè)Sham組和CIH組大鼠PVN中AngⅡ水平和AT1R表達(dá)的影響。
　　3.急性改變PVN中AngⅡ水平對(duì)大鼠MAP的影響
　

7、　實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為Sham組和CIH組，分別在Sham組和CIH組雙側(cè)PVN內(nèi)微量注射AngⅡ（0.03、0.3、3 nmol）改變AngⅡ的水平，觀察急性改變PVN中的AngⅡ水平對(duì)大鼠MAP的影響。
　　4.觀察AT1R拮抗劑LOS（50nmol）對(duì)慢性間歇性低氧大鼠血壓的影響
　　實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為Sham組和CIH組，分別在Sham組和CIH組雙側(cè)PVN內(nèi)微量注射NS、AngⅡ（0.3nmol）、LOS（50nmol）

8、、LOS（50nmol）+AngⅡ（0.3nmol）。觀察LOS（50nmol）對(duì)慢性間歇性低氧大鼠血壓的影響。
　　5.長期應(yīng)用LOS對(duì)大鼠尾動(dòng)脈壓SBP和PVN中AT1R蛋白的影響
　　實(shí)驗(yàn)分為Sham組、CIH組和CIH+LOS組三組。在造模的過程中5天，10天，15天分別用無創(chuàng)套尾法測(cè)大鼠尾動(dòng)脈收縮壓SBP，使用Western blot檢測(cè)這三組PVN中AT1R的表達(dá)，觀察長期應(yīng)用LOS對(duì)大鼠PVN中（AT1R）蛋白

9、表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.慢性間歇性低氧可以引起大鼠SBP、MAP明顯升高，前5天升高不明顯，從第5天開始明顯升高。
　　2.與Sham組相比，CIH組大鼠PVN內(nèi)AngⅡ水平及AT1R表達(dá)顯著增加。
　　3.雙側(cè)PVN內(nèi)微量注射AngⅡ（0.03、0.3、3nmol），均可劑量依賴性地升高Sham和CIH大鼠MAP，且CIH大鼠MAP升高更顯著。
　　4.雙側(cè)PVN內(nèi)微量注射AT1R阻斷劑LOS（

10、50nmol），對(duì)Sham大鼠血壓和心率都沒有影響，但可使CIH大鼠血壓降低，并抑制AngⅡ升壓作用。
　　5.長期應(yīng)用LOS可以部分抵消慢性間歇性低氧大鼠的血壓升高，慢性間歇性低氧大鼠PVN中AT1R蛋白表達(dá)與正常組有差異，但是長期應(yīng)用LOS大鼠PVN中AT1R蛋白表達(dá)與正常組沒有明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1.室旁核中AngⅡ及AT1R功能上調(diào)在慢性間歇性低氧誘發(fā)大鼠高血壓中起重要作用。
　　2.長期應(yīng)用LO