腺病毒介導(dǎo)的hIL-10抗大鼠肝損傷的體內(nèi)及體外研究.pdf

1、目的：探討腺病毒介導(dǎo)的hIL-10對(duì)大鼠肝損傷的保護(hù)作用。在體外細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)中,探究腺病毒介導(dǎo)的人白細(xì)胞介素-10(hIL-10)是否能對(duì)損傷的培養(yǎng)肝細(xì)胞發(fā)揮抗炎保護(hù)作用;在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,探究攜帶hIL-10基因的腺病毒的轉(zhuǎn)染效率,以及對(duì)損傷的大鼠肝組織有保護(hù)作用。
　　方法：首先構(gòu)建攜帶hIL-10的腺病毒載體。在體外實(shí)驗(yàn)中,先利用四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷模型,并在實(shí)驗(yàn)保護(hù)組細(xì)胞中,先加入腺病毒載體,培養(yǎng)24小時(shí),觀察細(xì)

2、胞存活率。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,向CCl4誘導(dǎo)的肝損傷模型大鼠尾靜脈中注射包含腺病毒介導(dǎo)的hIL-10的林格液,觀察其與對(duì)照組大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、肝纖維化四項(xiàng)指標(biāo)(血清透明質(zhì)酸、層粘連蛋白、III型前膠原、IV型膠原)以及病理結(jié)果對(duì)比;以增強(qiáng)綠色熒光蛋白(EGFP)作為熒光標(biāo)記,觀察腺病毒的轉(zhuǎn)染效率;并使用Elisa,Western Blot檢測(cè)hIL-10在大鼠血漿內(nèi)的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：在體外實(shí)驗(yàn)中,

3、大鼠肝細(xì)胞加入CCl4至終濃度0.5mol/L后,細(xì)胞出現(xiàn)明顯的損傷,細(xì)胞存活率下降至59％至72%之間,與空白對(duì)照組相比,差異具有顯著性(P<0.05)。當(dāng)細(xì)胞預(yù)先以MOI=1、5、10、50的感染強(qiáng)度感染病毒Ad5-hIL10,再加CCl4誘導(dǎo)劑,則細(xì)胞存活率隨MOI值升高而增加,至MOI=50時(shí),細(xì)胞存活率恢復(fù)至92%。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,通過尾靜脈向大鼠體內(nèi)注射含有腺病毒介導(dǎo)的hIL-10的林格液,發(fā)現(xiàn)一周之后,經(jīng)過處理大鼠的ALT和

4、AST都明顯低于沒有經(jīng)過處理的大鼠,且除IV-C之外,經(jīng)過處理的大鼠肝纖維化其他指標(biāo)都明顯低于沒有經(jīng)過處理的大鼠,病理學(xué)結(jié)果證明了此種處理方法能夠減輕CCl4對(duì)肝臟的損傷作用,減輕肝纖維化程度。研究同時(shí)發(fā)現(xiàn),攜帶腺病毒介導(dǎo)的hIL-10可以高效率轉(zhuǎn)染肝細(xì)胞,如本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果所示,熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)EGFP表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞平均為51.2%。但hIL-10體內(nèi)維持的時(shí)間并不長(zhǎng),通過Elisa和Western Blot,發(fā)現(xiàn)在8小時(shí)血漿中的hI