異鉤藤堿在肺動(dòng)脈高壓及PASMCs增殖中的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　1.探討異鉤藤堿對(duì)野百合堿(MCT)誘導(dǎo)大鼠肺動(dòng)脈高壓的影響。
　　2.探討異鉤藤堿對(duì)PDGF-BB誘導(dǎo)的PASMCs增殖的作用及機(jī)制。
　　方法:
　　1.將80只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為四組，正常對(duì)照組:皮下注射等量的生理鹽水后給予維持飼料飲食;IRN組:皮下注射等量的生理鹽水后給予含0.1％異鉤藤堿的維持飼料飲食;肺動(dòng)脈高壓(PAH)組:皮下注射野百合堿(40mg/kg)后給予維持飼料飲

2、食;PAH+IRN組:皮下注射野百合堿(40mg/kg)后給予含0.1％異鉤藤堿的維持飼料飲食。
　　2.3周后用右心導(dǎo)管測量右心室收縮壓，留取心臟、肺臟及其他器官稱重，分離心臟，分別稱量右心室和左心室+室間隔，計(jì)算心室肥厚指數(shù):右心室/左心室+室間隔(RV/LV+S)。天狼星紅染色法觀察心臟纖維化狀況，蘇木素-伊紅(HE)染色和免疫組織化學(xué)染色檢測肺血管重構(gòu)和肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖。Western Blot檢測肺組織中α-SMA和

3、PCNA的表達(dá)。
　　3.建立血小板源性生長因子(PDGF-BB)誘導(dǎo)的PASMCs增殖模型，通過四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)和臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測異鉤藤堿對(duì)PASMCs增殖的影響及細(xì)胞毒性，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期變化。Western Blot檢測細(xì)胞周期蛋白cyclin D1、 CDK6、p27kip1，及信號(hào)通路PDGFR、Akt、GSK3β、ERK1/2、STAT3的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　第一部分 異鉤藤堿對(duì)野百

4、合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈高壓的影響:
　　1.正常對(duì)照組大鼠體重259±4.5g，右心室重量159±4.5mg，左心室+室間隔(LV+S)重量639±13.3mg，肺組織重量1.23±0.05g;異鉤藤堿組大鼠體重256±3.3g，右心室重量160±4.1 mg，左心室+室間隔(LV+S)重量642±8.2mg，肺組織重量1.24±0.03g，兩組間無明顯差異（P＞0.05），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.正常對(duì)照組右心室收縮壓為

5、25.14±0.73mmHg，PAH組右心室收縮壓56.61±2.36mmHg，與正常對(duì)照組相比PAH組右心室收縮壓明顯升高（P＜0.05）;PAH+IRN組與PAH組相比，右心室收縮壓（48.09±2.4mmHg）明顯降低(P＜0.05)。
　　3.正常對(duì)照組右心室肥厚指數(shù)為0.25±0.01，與正常對(duì)照相比，PAH組右心室肥厚指數(shù)（0.56±0.03）明顯升高(P＜0.05)。天狼星紅染色和HE結(jié)果分析顯示:PAH組右心室纖維

6、化程度明顯增高、心肌細(xì)胞橫截面積明顯增大(P＜0.05);與PAH組相比，PAH+IRN組右心室纖維化程度明顯降低和心肌細(xì)胞橫截面積明顯減?。≒＜0.05）。
　　4.與正常對(duì)照組相比，PAH組肺組織完全肌化小動(dòng)脈比例明顯增高、小動(dòng)脈（50-200μm）中層厚度增加、PASMCs增殖活躍（P＜0.05），與PAH組相比，PAH+IRN組完全肌化小動(dòng)脈比例明顯降低、小動(dòng)脈中層厚度明顯減小、PASMCs增殖減低(P＜0.05)。Wes

7、tern blot結(jié)果顯示:PAH組肺組織中α-SMA和PCNA表達(dá)明顯增高（P＜0.05），與PAH組相比，PAH+IRN組α-SMA和PCNA表達(dá)明顯減少(P＜0.05)。
　　第二部分 異鉤藤堿對(duì)PDGF-BB誘導(dǎo)的PASMCs增殖的影響
　　1.在體外實(shí)驗(yàn)中，與正常對(duì)照組相比，加入PDGF-BB(20ng/ml)培養(yǎng)24h，可促進(jìn)PASMCs增值約2.5倍;異鉤藤堿呈劑量依賴性抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的PASMCs增殖

8、。異鉤藤堿（25μM）明顯抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的S期細(xì)胞比例升高。
　　2.Western Blot結(jié)果顯示異鉤藤堿可抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的cyclinD1、CDK6的表達(dá)和p27kip1的降解，下調(diào)PDGF-Rβ及其下游信號(hào)分子AKT、糖原合成激酶3β(GSK3β)、ERK1/2和STAT3的磷酸化。
　　結(jié)論:
　　異鉤藤堿可抑制野百合堿誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓和PDGF-BB誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖，其機(jī)制可能為