應用實時熒光定量PCR的miRNA芯片技術(shù)研究脂肪肉瘤的miRNA表達差異譜.pdf

1、背景與目的:軟組織腫瘤(soft tissue sarcomas，STS)是一類很少見的腫瘤，具有多種組織類型。而在這些組織類型中最多見的是脂肪肉瘤。脂肪肉瘤發(fā)生在后腹膜，可以很長一段時間沒有任何癥狀，脂肪肉瘤最大的特點就是易于復發(fā)，較少轉(zhuǎn)移。根據(jù)2002年WHO對脂肪肉瘤的分類標準，脂肪肉瘤分為5個組織亞型，歸類為3個生物學類型:1）高分化脂肪肉瘤和低分化脂肪肉瘤;2）粘液細胞型/圓型細胞型脂肪肉瘤;3）多形性脂肪肉瘤。去分化脂肪肉瘤

2、、圓型細胞型脂肪肉瘤和多形性脂肪肉瘤被認為是惡性程度較高、侵襲性較強的種類;而粘液細胞型脂肪肉瘤及高分化脂肪肉瘤則被認為是低度惡性種類。手術(shù)的完整切除是現(xiàn)今治療的基石。切緣陰性（1-2cm）代表良好的結(jié)果，但是脂肪肉瘤大都發(fā)生于后腹膜，因此完整切除困難，更加大了復發(fā)的可能。目前化學療法以及放射療法多用于輔助治療，但除了MLS/RCLS外療效較差，因此現(xiàn)在急切需要發(fā)展新的靶向治療方法。microRNAs(miRNAs)是一類含有18-24

3、個核苷酸(nt)的單鏈RNA，負向調(diào)節(jié)靶向mRNAs的表達。MiRNAs的表達異?？梢愿淖兗毎姆只鹉[瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移和復發(fā)，miRNAs可以作為癌基因和抑癌基因存在，已經(jīng)有多種靶向miRNA的抗腫瘤藥物研發(fā)出來應用于臨床，并且取得較好療效?，F(xiàn)今在脂肪肉瘤領(lǐng)域，miRNAs的研究非常少，本研究用miRNA高通量芯片對25例脂肪肉瘤組織，18例脂肪肉瘤患者的正常深部脂肪組織（距離腫瘤邊緣大于5cm）和16例脂肪瘤肉瘤旁組織(距離

4、腫瘤邊緣小于1cm)進行miRNA的篩選，分析脂肪肉瘤間的特異性miRNA表達差異譜，為未來的進一步探索與其相關(guān)的分子機制，尋找新的治療靶點開發(fā)新藥研究做鋪墊。
　　方法:應用基于實時熒光定量PCR的miRNA芯片技術(shù)，對25例脂肪肉瘤組織，18例脂肪肉瘤患者的正常深部脂肪組織（距離腫瘤邊緣大于5cm）和16例脂肪瘤肉瘤旁組織(距離腫瘤邊緣小于1cm)進行1920個miRNA的篩選，分析脂肪肉瘤間的特異性miRNA表達差異譜。應用

5、實時熒光定量PCR對部分表達差異的miRNAs在脂肪肉瘤和脂肪細胞中的表達進行驗證。
　　結(jié)果:對熒光定量PCR芯片結(jié)果進行分析發(fā)現(xiàn)，脂肪肉瘤和正常深部脂肪組織的miRNAs表達差異:40個miRNAs在脂肪肉瘤中表達增高，21個miRNAs表達降低;脂肪肉瘤和瘤旁脂肪組織的miRNAs表達差異:121個miRNAs存在表達差異;瘤旁脂肪組織和正常深部組織的miRNAs表達差異:9個miRNAs在瘤旁脂肪組織中高表達，2個低表達;

6、脂肪肉瘤各亞型之間miRNAs表達存在差異。通過SVM方法得出8個miRNAs(has-miR-369-3p，has-miR-196a，has-miR-135b，has-miR-376b,has-miR-486-5p,has-miR-486-3p,has-miR-497,has-miR-144*)在正常組織、瘤旁組織和脂肪肉瘤中存在顯著差異;進一步熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)在脂肪肉瘤細胞和正常脂肪細胞系中存在有相同的表達差異。
　　結(jié)