不同產(chǎn)地葎草的品質(zhì)對(duì)比研究.pdf

1、葎草為桑科植物葎草Humulus scandens（Lour.）Merr.的干燥地上部分，具有清熱解毒，利尿通淋的功效，主治肺熱咳嗽、肺癰、肺結(jié)核、虛熱煩渴、熱淋、水腫、小便不利、濕熱瀉痢、熱毒瘡瘍、皮膚瘙癢等。
　　本文在前期葎草的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及抗結(jié)核有效部位研究的基礎(chǔ)上，對(duì)不同產(chǎn)地葎草進(jìn)行了品質(zhì)對(duì)比研究，并對(duì)不同生長(zhǎng)期的葎草進(jìn)行了有效成分動(dòng)態(tài)變化研究，為完善和提高葎草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及適宜采收期的選擇提供了參考依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下

2、：
　　1.首次進(jìn)行了葎草不同生長(zhǎng)時(shí)期干物質(zhì)積累及有效成分的動(dòng)態(tài)變化研究，并運(yùn)用主成分分析法，對(duì)有效成分的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了綜合分析，為葎草適宜采收期的確定提供了參考依據(jù)。
　　對(duì)兩個(gè)不同產(chǎn)地、一個(gè)生長(zhǎng)周期不同采收時(shí)間葎草的干物質(zhì)積累及浸出物、總黃酮、木犀草素和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量進(jìn)行動(dòng)態(tài)測(cè)定，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地干物質(zhì)積累及浸出物、總黃酮、木犀草素和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量差異大，同一產(chǎn)地不同采收

3、時(shí)間浸出物、總黃酮、木犀草素和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量有明顯的區(qū)別，采用主成分分析法對(duì)有效成分的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行多指標(biāo)綜合分析，發(fā)現(xiàn)四川成都地區(qū)葎草主成分因子得分較高為2月，河北唐山地區(qū)葎草樣品主成分因子得分較高者為8月，說(shuō)明不同產(chǎn)地有效成分積累動(dòng)態(tài)有差異，可能與這兩個(gè)地區(qū)分屬于南方、北方，地理位置、環(huán)境、氣候等自然條件相差較大有關(guān)，提示其采收期的確定應(yīng)考慮產(chǎn)地因素。
　　2.首次對(duì)不同產(chǎn)地葎草進(jìn)行了藥材性狀的對(duì)比研究，

4、找出了其外觀性狀上的異同。
　　通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地葎草外觀性狀的仔細(xì)觀察，發(fā)現(xiàn)其性狀特征有所不同，主要體現(xiàn)在顏色、葉表面的剛毛及腺點(diǎn)等方面：多數(shù)樣品纏結(jié)成團(tuán)，少數(shù)樣品已切成段；顏色多為黃綠色，少為棕黃色或棕綠色；葉表面差別較明顯，主要是上、下表面剛毛、腺點(diǎn)的密度有差異；帶果實(shí)的樣品，其果實(shí)的顏色及表面的斑紋有差異。
　　3對(duì)不同產(chǎn)地葎草進(jìn)行了木犀草素、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的薄層色譜鑒別研究。
　　3.1按照20

5、10年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的木犀草素薄層鑒別方法，對(duì)32批樣品進(jìn)行了木犀草素的薄層鑒別。結(jié)果顯示，其中3號(hào)（浙江仙居）、4號(hào)(廣東韶關(guān))、7號(hào)（甘肅宕昌）、8號(hào)（江蘇連云港）、11號(hào)（湖南長(zhǎng)沙）、16號(hào)（四川宜賓）、21號(hào)（山東青島）、23號(hào)（河北唐山）、24號(hào)（江西南昌）、25號(hào)（江西吉安）、28號(hào)（北京豐臺(tái)區(qū)）、29號(hào)（重慶南川）、30號(hào)（上海崇明島）、31號(hào)（安徽亳州藥材市場(chǎng)）和32號(hào)（廣西玉林藥材市場(chǎng)）15個(gè)樣品，在與木

6、犀草素對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點(diǎn)，但斑點(diǎn)的大小和熒光的強(qiáng)弱有所不同，其它樣品未檢出木犀草素，提示不同產(chǎn)地葎草在該成分的有無(wú)及量上有差異。
　　3.2通過(guò)對(duì)樣品前處理、展開(kāi)系統(tǒng)、點(diǎn)樣量、展距、展開(kāi)濕度、展開(kāi)溫度及薄層板飽和時(shí)間等的考察，首次建立了芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的薄層鑒別方法。以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（8:6:3:1）為展開(kāi)系統(tǒng)，分離效果較好，斑點(diǎn)多而清晰，Rf值適中。通過(guò)對(duì)32批不同產(chǎn)地及商

7、品葎草進(jìn)行薄層色譜實(shí)驗(yàn)，表明該方法對(duì)葎草芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的鑒別效果較好。32批供試品色譜中，1號(hào)（遼寧撫順）、3號(hào)（浙江仙居）、4號(hào)（廣東韶關(guān)）、5號(hào)（陜西咸陽(yáng)）、7號(hào)（甘肅宕昌）、8號(hào)（江蘇連云港）、11號(hào)（湖南長(zhǎng)沙）、16號(hào)（四川宜賓）、20號(hào)（山東濟(jì)南）、21號(hào)（山東青島）、23號(hào)（河北唐山）、24號(hào)（江西南昌）、25號(hào)（江西吉安）、26號(hào)（福建福州）、28號(hào)（北京豐臺(tái)區(qū)）、29號(hào)（重慶南川）和30號(hào)（上海崇明島）

8、17批樣品，在與芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃綠色熒光斑點(diǎn)，但斑點(diǎn)的大小和熒光的強(qiáng)弱有所不同，其它樣品未檢出芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，提示不同產(chǎn)地葎草在該成分的有無(wú)及量上有差異。
　　4首次進(jìn)行了葎草HPLC指紋圖譜研究，建立了葎草的HPLC指紋圖譜分析方法，并對(duì)不同產(chǎn)地葎草進(jìn)行了聚類分析，為弄清不同產(chǎn)地葎草化學(xué)成分的差異性提供了參考依據(jù)。
　　4.1通過(guò)對(duì)色譜條件的篩選、梯度洗脫

9、方式的考察、供試品溶液制備的考察以及精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的方法學(xué)驗(yàn)證，建立了葎草乙酸乙酯部位的指紋圖譜。通過(guò)對(duì)32批葎草樣品HPLC指紋圖譜的分析，確定了15個(gè)共有峰。
　　4.2對(duì)葎草乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜進(jìn)行相似度分析，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地葎草藥材指紋圖譜相似度較低。進(jìn)行聚類分析，結(jié)果表明，以距離15劃分，可聚為兩類，相似度在0.7以上的樣品，包括5號(hào)（陜西咸陽(yáng)）、6號(hào)（山西運(yùn)城）、7號(hào)（甘肅宕昌）、9號(hào)（貴州安順）、1

10、0號(hào)（貴州貴陽(yáng)）、13號(hào)（成都溫江區(qū)）、14號(hào)（成都錦江區(qū)）、15號(hào)（四川西昌）、18號(hào)（四川彭州）、19號(hào)（四川遂寧），可聚為一類，其余樣品聚為一類；以距離10劃分，可聚為3類，相似度在0.7以上的樣品，聚為一類，0.3~0.7之間的樣品，包括2號(hào)（河南南陽(yáng)）、4號(hào)（廣東韶關(guān)）、11號(hào)（湖南長(zhǎng)沙）、12號(hào)（廣西河池）、16號(hào)（四川宜賓）、17號(hào)（四川綿陽(yáng)）、3號(hào)（浙江仙居）、24號(hào)（江西南昌）、25號(hào)（江西吉安）、26號(hào)（福建福州）、

11、27號(hào)（福建漳州）、32號(hào)（廣西玉林藥材市場(chǎng)），可聚為一類，其余樣品聚為一類。
　　5對(duì)32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行了水分、總灰分及酸不溶性灰分的檢查和浸出物的測(cè)定。
　　5.1按照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的方法，對(duì)32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行水分測(cè)定。所測(cè)32批不同產(chǎn)地的葎草樣品水分含量最高為9.7％，最低為4.9%。參照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中水分不得過(guò)10.0%的規(guī)定，32批樣品均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

12、r>　　5.2按照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的方法，對(duì)32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行總灰分及酸不溶性灰分的測(cè)定。所測(cè)32批樣品總灰分最高為
　　19.83%，最低為10.43%；酸不溶性灰分最高為4.56%，最低為0.30%。參照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，總灰分不得過(guò)19.0%，酸不溶性灰分不得過(guò)5.0%的規(guī)定，除24號(hào)（江西南昌）樣品總灰分不符合標(biāo)準(zhǔn)外，其余均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
　　5.3按照2010年版《四川

13、省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的方法，對(duì)32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行浸出物的測(cè)定。結(jié)果表明，32批不同產(chǎn)地葎草樣品的浸出物含量最高為21.88%，最低為8.73%。參照2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中葎草浸出物含量不得少于12.0%的規(guī)定，22號(hào)（重慶沙坪壩）、30號(hào)（上海崇明島）、31號(hào)（安徽亳州藥材市場(chǎng)）、32號(hào)（廣西玉林藥材市場(chǎng)）樣品不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。6首次建立了葎草總黃酮的紫外分光光度法測(cè)定方法、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的HPLC含

14、量測(cè)定方法，并對(duì)32批不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行了總黃酮、木犀草素及芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定，為完善葎草質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及對(duì)比分析不同產(chǎn)地葎草質(zhì)量差異提供參考依據(jù)。
　　6.1對(duì)葎草進(jìn)行了紫外-分光光度法測(cè)定總黃酮含量的實(shí)驗(yàn)研究。通過(guò)對(duì)供試品溶液制備、精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收等的方法學(xué)考察，建立了以木犀草素為對(duì)照品的葎草總黃酮的紫外-分光光度法測(cè)定方法。運(yùn)用該方法對(duì)不同產(chǎn)地樣品進(jìn)行總黃酮含量的測(cè)定，結(jié)果表明，不同產(chǎn)

15、地葎草樣品的總黃酮含量差異較大，3號(hào)（浙江仙居）、4號(hào)（廣東韶關(guān)）、5號(hào)（陜西咸陽(yáng)）、12號(hào)（廣西河池）、16號(hào)（四川宜賓）、19號(hào)（四川遂寧）、26號(hào)（福建福州）和28號(hào)（北京豐臺(tái)區(qū)）8個(gè)樣品含量較高，22號(hào)（重慶沙坪壩）、24號(hào)（江西南昌）、30號(hào)（上海崇明島）、31號(hào)（安徽亳州藥材市場(chǎng)）、32號(hào)（廣西玉林藥材市場(chǎng)）5個(gè)樣品含量相對(duì)較低。
　　6.2按照前期建立的木犀草素HPLC含量測(cè)定方法，對(duì)不同產(chǎn)地葎草樣品進(jìn)行了木犀草素的

16、含量測(cè)定。結(jié)果表明，4號(hào)（廣東韶關(guān)）、8號(hào)（江蘇連云港）、16號(hào)（四川宜賓）、23號(hào)（河北唐山）、28號(hào)（北京豐臺(tái)區(qū)）5個(gè)樣品中木犀草素含量較高；2號(hào)（河南南陽(yáng)）、6號(hào)（山西運(yùn)城）、10號(hào)（貴州貴陽(yáng)）、12號(hào)（廣西河池）、13號(hào)（成都溫江區(qū)）、14號(hào)（成都錦江區(qū)）、15號(hào)（四川西昌）、18號(hào)（四川彭州）、22號(hào)（重慶沙坪壩）和27號(hào)（福建漳州）10個(gè)樣品中未測(cè)出木犀草素含量。此結(jié)果與薄層色譜鑒別結(jié)果基本一致。
　　6.3對(duì)葎草進(jìn)行

17、了HPLC芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷含量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)研究。通過(guò)進(jìn)行測(cè)定波長(zhǎng)及色譜條件的選擇、供試品溶液的制備方法的考察，以及精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收試驗(yàn)的方法學(xué)驗(yàn)證，建立了葎草芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的HPLC測(cè)定方法。運(yùn)用該方法對(duì)不同產(chǎn)地樣品進(jìn)行芹菜素-7- O-β-D-葡萄糖苷含量的測(cè)定，結(jié)果表明，1號(hào)（遼寧撫順）、3號(hào)（浙江仙居）、8號(hào)（江蘇連云港）、11號(hào)（湖南長(zhǎng)沙）、16號(hào)（四川宜賓）、21號(hào)（山東濟(jì)南）、