不同產(chǎn)地柴胡的ISSR分子標(biāo)記及品質(zhì)研究.pdf

1、目的：探討不同產(chǎn)地不同品種柴胡的遺傳多樣性和親緣關(guān)系，及其與藥材品質(zhì)的相關(guān)性，對(duì)我省柴胡GAP基地柴胡種質(zhì)做出評(píng)價(jià)，為進(jìn)一步選種育種提供相關(guān)的理論依據(jù)。 方法：以?？挡窈鶪AP種植基地北柴胡為研究重點(diǎn)，并收集兩個(gè)其他種植基地北柴胡及兩個(gè)野生北柴胡作比較，以三島柴胡和銀州柴胡作為種外參照。通過(guò)高效液相色譜法(HPLC法)對(duì)柴胡主要有效成分柴胡皂苷a和柴胡皂苷d進(jìn)行含量分析，判斷柴胡品種是否優(yōu)良。另外，采用簡(jiǎn)單重復(fù)序列問(wèn)區(qū)擴(kuò)增(IS

2、SR-PCR)標(biāo)記不同產(chǎn)地柴胡的DNA，檢測(cè)其遺傳多態(tài)性并計(jì)算遺傳距離。 采用HPLC法對(duì)9個(gè)樣品中的柴胡皂苷a、d進(jìn)行了含量測(cè)定。對(duì)HPLC的各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行了比較，最終確定使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；乙腈-水(40：60)為流動(dòng)相，流速為1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為204nm；柱溫為25℃。 采用試劑盒法提取9個(gè)樣品葉片的總DNA，正交設(shè)計(jì)優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，隨機(jī)篩選60個(gè)ISSR引物，選取對(duì)各樣品均

3、能穩(wěn)定擴(kuò)增出三條以上電泳條帶的引物作為實(shí)驗(yàn)有效引物，分別對(duì)9個(gè)樣品進(jìn)行擴(kuò)增。凝膠檢測(cè)電泳條帶，按相同遷移位置上有擴(kuò)增條帶(不論強(qiáng)弱)計(jì)為1，無(wú)帶計(jì)為0，得到全部樣品的7條引物的ISSR圖譜二態(tài)數(shù)據(jù)矩陣，用NTSYS2.10軟件計(jì)算個(gè)體間的Nei相似系數(shù)，進(jìn)行UPGMA聚類分析，構(gòu)建聚類系統(tǒng)樹(shù)狀圖。 結(jié)果： HPLC結(jié)果顯示柴胡品質(zhì)由高到低的產(chǎn)地依次為商洛、甘肅(野生銀州柴胡)、北京藥植所(三島柴胡)、?？堤贫?2、北京

4、中柴1號(hào)、?？蛋布覟?、山西野生、?？堤贫?3、?？堤贫?1。柴胡皂苷總量跨度較大，最高值為最低值的兩倍。所建立的HPLC方法的柴胡皂苷a、d平均回收率分別為99.29％、99.44％，RSD分別為0.73％、0.82％，證明所用方法準(zhǔn)確可靠，可用于柴胡中柴胡皂苷a、d的含量測(cè)定。 ISSR結(jié)果顯示，7條引物共擴(kuò)增出81條條帶，其中多態(tài)性條帶79條，占97.5％。引物808和828各擴(kuò)增到1條所有樣品的共有條帶。銀州柴胡和三島

5、柴胡與其他多個(gè)北柴胡既有相似性，也有特異性，如引物818，848和856的電泳結(jié)果。UPGMA聚類分析顯示三個(gè)?？堤贫颖辈窈蹫橐活悾a(chǎn)地內(nèi)遺傳特性穩(wěn)定。保康安家灣北柴胡與唐二河地區(qū)遺傳距離較遠(yuǎn)。甘肅野生銀州柴胡與安家灣和中柴1號(hào)兩個(gè)北柴胡聚為一類，提示可能發(fā)生了種內(nèi)遺傳變異。三島柴胡相對(duì)獨(dú)立于其他品種柴胡，與品種鑒定相符。山西野生柴胡與三島柴胡聚為一類，也可能發(fā)生了種內(nèi)遺傳變異。 結(jié)論：3個(gè)GAP種植基地中，商洛柴胡品質(zhì)最