脂聯(lián)素和脂聯(lián)素抗體通過殼聚糖水凝膠對骨關節(jié)炎的影響研究.pdf

1、目的：骨關節(jié)炎(OA)是常見的關節(jié)疾病，發(fā)病率高和致殘率較高，并且缺乏有效控制病情或逆轉病情的保守治療方法。OA的發(fā)病機制尚不完全明確，近年來不少研究發(fā)現(xiàn)，力學負荷超載導致機械性的軟骨破壞只能部分解釋肥胖與OA的聯(lián)系，肥胖時異常分泌的脂肪因子可能具有重要的病理生理作用。通過對OA發(fā)病機制的研究，可以發(fā)現(xiàn)OA發(fā)生發(fā)展中的重要作用因子，探索控制病情的治療方案，具有重要的臨床意義。本研究包括兩個部分：1、研究脂肪因子脂聯(lián)素和脂聯(lián)素單克隆抗體對

2、軟骨細胞的影響。2、配制殼聚糖-甘油磷酸二鈉溫敏水凝膠，并評估其細胞相容性。
　　 方法：1、培養(yǎng)軟骨細胞，在鏡下觀察細胞形態(tài)，并用脂聯(lián)素和脂聯(lián)素單抗刺激細胞，通過熒光定量PCR檢測IL-6和膠原蛋白表達量。2、配制殼聚糖-甘油磷酸二鈉溫敏水凝膠，研究凝膠的溫敏特性，并通過CCK-8法評估其細胞相容性。
　　 結果：1、1μg/ml脂聯(lián)素可促使軟骨細胞表達大量的IL-6，較對照組表達量高110倍(P＜0.001)，通過換

3、液去除培養(yǎng)基中的脂聯(lián)素后，IL-6的表達量又明顯下降(P＜0.001)，提示脂聯(lián)素可刺激軟骨細胞產(chǎn)生IL-6。1μg/ml脂聯(lián)素單抗刺激軟骨后IL-6的表達量僅稍高于對照組。質量分數(shù)相等的脂聯(lián)素和脂聯(lián)素單抗同時刺激軟骨細胞，IL-6的表達量與脂聯(lián)素單獨刺激軟骨細胞時的表達量無明顯差異。提示脂聯(lián)素單抗沒有阻斷脂聯(lián)素與其受體的作用，或者抗體的量相對于脂聯(lián)素量過小。Ⅱ型膠原酶的表達量顯示，脂聯(lián)素減少了軟骨細胞Ⅱ型膠原蛋白的表達，而脂聯(lián)素抗體可

4、以增加Ⅱ型膠原蛋白的表達量。2、通過混合不同比例的殼聚糖和甘油磷酸，得到了可以在生理溫度下凝固的水凝膠。試驗發(fā)現(xiàn)，CS含量固定時，膠凝溫度隨GP的含量增高而降低，膠凝時間隨GP的含量增高而縮短。通過CCK-8法評估CS/GP凝膠的相容性，發(fā)現(xiàn)在不同量凝膠的刺激下，軟骨細胞均可緩慢的增長，而細胞活力在緩慢增長后出現(xiàn)了緩慢下降的趨勢。
　　 結論：1、脂聯(lián)素可致軟骨細胞IL-6表達量增高，并且降低了Ⅱ型膠原的表達，在OA的發(fā)生發(fā)展過