miR-148a的甲基化在胃癌發(fā)生中的意義的研究.pdf

1、目的：
　　 微小RNA(microRNA,miRNA)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類21-25個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼小RNA,miRNA基因先轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生miRNA的初級(jí)產(chǎn)物-pri-miRNA,它被Rnasem內(nèi)切酶切割成70個(gè)核苷酸序列的miRNA.的前體-pre-miRNA,pre-miRNA再被Dicer酶切割成約22nt的miRNA的成熟體。成熟的miRNA形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體,成熟miRNA的5’-非翻譯區(qū)的2-7個(gè)核苷酸的“

2、種子序列”可以與靶mRNA的3’-非翻譯區(qū)互補(bǔ)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平上抑制靶基因的表達(dá)。1993年,首個(gè)miRNA-lin-4被發(fā)現(xiàn),從此揭開了對(duì)miRNA研究的序幕。隨后大量研究發(fā)現(xiàn)了至少500種這類小分子RNA,其中在人類染色體上就有300余種。它在細(xì)胞的生長、增殖、發(fā)育和凋亡過程中發(fā)揮著重要作用,并與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。MiRNA在腫瘤中發(fā)揮著相當(dāng)于癌基因或抑癌基因的作用,調(diào)節(jié)著腫瘤細(xì)胞的多種重要生物學(xué)行為。
　　 胃癌

3、是世界上常見的惡性腫瘤之一,尤其在中國、韓國及日本等亞洲國家。它的發(fā)病是多因素、多步驟的復(fù)雜過程。目前發(fā)現(xiàn)很多miRNAs在胃癌中異常表達(dá)。MiR-148a作為在胃癌中發(fā)現(xiàn)的其中一種miRNA,已證實(shí)在胃癌中存在異常表達(dá)。DNA甲基化是指在DNA雙螺旋中,胞嘧啶核苷的嘧啶環(huán)第五位碳原子在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyl transferase,DNMTs)的介導(dǎo)下以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作為甲基供體而發(fā)生甲基化。研究發(fā)現(xiàn)在許多

4、腫瘤中存在不同程度的DNA異常甲基化現(xiàn)象?；騿?dòng)子區(qū)域CpG島發(fā)生的異常甲基化可以使轉(zhuǎn)錄沉默,導(dǎo)致某些抑癌基因表達(dá)下調(diào),從而參與了腫瘤的形成和發(fā)展。MiRNA啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的異常甲基化可能是腫瘤中的主要表觀遺傳學(xué)改變之一。越來越多的研究表明,miR-148a啟動(dòng)子區(qū)CpG島發(fā)生異常甲基化與胃癌有著非常密切的關(guān)系。
　　 在本研究中,我們參考國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)及前期關(guān)于胃癌的miR-148a表達(dá)情況的研究,確定其為我們的研究重點(diǎn)

5、。利用亞硫酸鹽處理后測(cè)序和甲基化特異性PCR技術(shù)檢測(cè)了胃癌及其癌旁組織miR-148b啟動(dòng)子區(qū)域CpG島甲基化的情況。通過與表達(dá)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,初步探索其在胃癌的發(fā)生中的作用。
　　 方法：
　　 收集40對(duì)胃癌患者腫瘤及癌旁組織手術(shù)標(biāo)本,經(jīng)提取DNA后,運(yùn)用亞硫酸鹽處理后測(cè)序和甲基化特異性PCR檢測(cè)miR-148a在組織中的甲基化情況。然后運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析miR-148a與表達(dá)之間的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：

6、
　　 40例胃癌標(biāo)本組織中檢測(cè)miR-148a啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化17例(42.5%)、部分甲基化22例(55%)、非甲基化1例(2.5%);40例相應(yīng)癌旁組織中甲基化13例(32.5%)、部分甲基化27例(67.5%)。胃癌組織與癌旁正常組織的甲基化狀態(tài)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.36)。卡方檢驗(yàn)表明甲基化狀態(tài)與表達(dá)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.648),線性趨勢(shì)檢驗(yàn)兩者沒有聯(lián)系(P=0.36)。
　　 結(jié)論：