Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化在胃癌中的臨床意義.pdf

1、目的：胃癌在我國(guó)是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率一直位于男女惡性腫瘤的前列，嚴(yán)重威脅著國(guó)民健康。胃癌的早期癥狀不明顯，而且缺乏有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，到醫(yī)院就診的患者往往已經(jīng)達(dá)胃癌的中晚期，治療花費(fèi)大、療效差、生存率低。因此，臨床迫切需要尋找有效的腫瘤標(biāo)記物和腫瘤治療靶點(diǎn)，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療胃癌，阻斷腫瘤進(jìn)展、精準(zhǔn)治療和提高患者的預(yù)后。隨著對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的深入了解，越來(lái)越多證據(jù)表明，抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)的異常甲基化在胃癌的發(fā)生和

2、發(fā)展中扮演著重要的角色。對(duì)抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化進(jìn)行分析可以作為腫瘤早期監(jiān)測(cè)和預(yù)防的手段。因此，本研究選取抑癌基因Kiss-1作為研究指標(biāo)，采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MSP)方法檢測(cè)胃癌組織和癌旁胃正常黏膜組織中Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用以及與臨床病理資料之間的關(guān)系。
　　方法:
　　1.研究對(duì)象及分組:2014年9月至2016年6月期間，在河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院行手術(shù)治療的40例胃

3、癌患者(術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療)，其中男性32例，女性8例，平均年齡65.25±9.47歲。分組情況：胃癌組40例(均來(lái)自手術(shù)切除的腫瘤組織)；對(duì)照組30例(選取前述患者癌旁胃正常黏膜組織，距腫瘤邊緣5cm以上)。新鮮組織標(biāo)本離體后立即置于入冰盒中，隨即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱貯存待用。
　　具體病例資料：臨床TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期15例、Ⅲ+IV期25例；腫瘤分化程度：中高分化26例、低分化14例；腫瘤浸潤(rùn)情況：侵透漿膜19例、未侵透漿膜

4、21例；腫瘤病理組織學(xué)類型均為腺癌，其中伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例。所有癌組織及癌旁組織均經(jīng)過(guò)術(shù)后病理檢查確診。
　　2.實(shí)驗(yàn)原理:甲基化特異性PCR(MSP)法基本原理：用亞硫酸氫鈉處理基因組DNA，未被甲基化的胞嘧啶將發(fā)生氧化性脫氨基作用變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則不會(huì)發(fā)生這種變化，然后分別用甲基化引物和非甲基化引物對(duì)所測(cè)基因的同一段核苷酸序列進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，凝膠成像系統(tǒng)掃描分析結(jié)果。

5、
　　3.結(jié)果判定
　　3.1.如果只有甲基化引物擴(kuò)增出相應(yīng)的條帶，判定Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)完全甲基化；
　　3.2.如果只有非甲基化引物擴(kuò)增出相應(yīng)的條帶，判定Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)沒(méi)有發(fā)生甲基化；
　　3.3.如果兩種引物均能擴(kuò)增出相應(yīng)的條帶，判定Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)不全甲基化。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件分析所得數(shù)據(jù)，組間率的比較用?2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義。
　　結(jié)果:
　　1.Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況:Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽(yáng)性率在胃癌組為72.5％(29/40)，在癌旁正常組為33.3%(10/30)，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)與胃癌患者臨床病理資料之間的關(guān)系:胃癌組中：Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽(yáng)性率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及TNM分期III+IV組分別明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及TNM分期I+II組，與淋巴

7、結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)，與患者的性別、年齡和胃癌的病理分化程度、浸潤(rùn)情況無(wú)關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.胃癌組中Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化顯著高于癌旁正常組，提示Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化可能參與了胃癌的發(fā)病過(guò)程。
　　2.Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化多見(jiàn)于胃癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者和臨床分期晚者，提示檢測(cè)Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)有助于判斷胃癌患者預(yù)后。
　　3.Kiss-1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島有潛