GPX3甲基化及蛋白表達(dá)在胃癌中的臨床意義.pdf

1、目的:胃癌（Gastric cancer，GC）是發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤，居世界惡性腫瘤發(fā)病率的第四位和死亡率的第二位[1，2]。2012中國(guó)腫瘤登記年報(bào)數(shù)據(jù)，在中國(guó)腫瘤登記地區(qū)，胃癌占惡性腫瘤發(fā)病率的第二位和死亡率的第三位，嚴(yán)重威脅著人們的健康和生命[3]。隨著醫(yī)療的進(jìn)步，有關(guān)胃癌的診治研究不斷完善，但其病死率仍呈逐年上升趨勢(shì)，防治形勢(shì)嚴(yán)峻[4]。因此，探索胃癌發(fā)病機(jī)制，以期早期發(fā)現(xiàn)、診斷和治療胃癌仍然是當(dāng)前研究的重點(diǎn)。近年來，

2、表觀遺傳學(xué)在惡性腫瘤中的研究愈來愈受到重視。研究表明，DNA甲基化作為一種重要的表觀遺傳機(jī)制，在胃癌的發(fā)病過程中起了重要作用[5，6]。在機(jī)體的抗過氧化物酶防御體系中，谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase，GPX)是其中重要的組成部分，它對(duì)人體過氧化氫及脂質(zhì)過氧化物等活性氧成分的清除發(fā)揮了特有的功能。GPX3是GPX的一種重要細(xì)胞外亞型[7]。研究顯示，GPX3基因啟動(dòng)子CpG島的高甲基化可使GPX3的蛋白表達(dá)

3、下調(diào)，導(dǎo)致體內(nèi)過氧化物含量增多，參與惡性腫瘤的發(fā)病過程[8-10]。本組使用甲基化PCR(methylation specific PCR，MSP)檢測(cè)胃癌與慢性胃炎對(duì)照組的血標(biāo)本中GPX3基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的狀態(tài)，免疫組化法檢測(cè)胃癌與正常對(duì)照組的組織標(biāo)本中GPX3蛋白表達(dá)情況，探討GPX3基因啟動(dòng)子CpG島的甲基化在胃癌發(fā)病中的作用機(jī)制及與臨床病理特征間的聯(lián)系。
　　方法:采用病例對(duì)照研究的方法，收集本院2012-2014年期間

4、住院患者共70例，所有入選者均經(jīng)過詳細(xì)的問卷調(diào)查，詳細(xì)了解個(gè)人史及家族史，并排除其它腫瘤病史。所有入選病例均簽署知情同意書。分組:慢性胃炎組35例，胃癌組35例。胃炎組男性18例，女性17例，年齡35-75歲，平均年齡60.35±4.54歲。胃癌組男性21例，女性14例，年齡45-80歲，平均年齡65.65±4.34歲，兩組患者在年齡及性別上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各組病例分別抽取全血2ml，立即存放于液氮罐轉(zhuǎn)運(yùn)，然后將標(biāo)本存放于-80℃冰箱待進(jìn)

5、一步檢測(cè)。每份血標(biāo)本分別提取基因組DNA，通過亞硫酸氫鹽處理后采用甲基化特異性PCR(MSP)方法來檢測(cè)胃炎組和胃癌組血標(biāo)本中GPX3基因啟動(dòng)區(qū)CpG島甲基化程度。胃炎組通過胃鏡檢查留取胃粘膜組織標(biāo)本。胃癌組患者均于我院普外科行胃切除手術(shù)，分別取癌灶中央非壞死區(qū)域標(biāo)本及與之配對(duì)的距離癌組織5cm以上的癌旁組織標(biāo)本，均經(jīng)病理組織學(xué)專家診斷證實(shí)后入組。所有手術(shù)病例在治療前均未接受過放療和化療。所取組織標(biāo)本給予蠟塊包埋，采用免疫組化的方法來檢

6、測(cè)胃炎組、胃癌組及癌旁組標(biāo)本中GPX3蛋白的表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS16.0軟件對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用x2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、檢測(cè)胃炎組(10/35，28.57％)及胃癌組(23/35，65.71％)血標(biāo)本GPX3啟動(dòng)子CpG島甲基化狀態(tài)，結(jié)果顯示胃癌組的甲基化表達(dá)顯著高于胃炎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2、胃癌組

7、GPX3啟動(dòng)子CpG島甲基化狀態(tài)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與患者年齡、性別、腫瘤分化程度、浸潤(rùn)情況、TNM分期無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3、檢測(cè)慢性胃炎組(26/35，74.29％)、胃癌組(13/35，37.15％)、癌旁組(23/35，65.71％)組織標(biāo)本中的GPX3蛋白表達(dá)情況，慢性胃炎組及癌旁組GPX3蛋白表達(dá)顯著高于胃癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　

8、　4、慢性胃炎組(26/35，74.29％)的GPX3蛋白表達(dá)與癌旁組(23/35，65.71％)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5、胃癌組GPX3蛋白表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與患者年齡、性別和腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)情況、TNM分期無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、胃癌血標(biāo)本中GPX3啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化程度高，而癌組織標(biāo)本GPX3蛋白表達(dá)明顯

9、下調(diào)，推測(cè)GPX3通過啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化導(dǎo)GPX3蛋白下調(diào)參與胃癌的發(fā)生進(jìn)程。
　　2、胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組GPX3啟動(dòng)子CpG島甲基化表達(dá)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示GPX3啟動(dòng)子CpG島甲基化與胃癌的進(jìn)展，有潛力成為判斷胃癌進(jìn)展和預(yù)后的預(yù)警分子指標(biāo)。
　　3、胃癌組血標(biāo)本中的GPX3啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化程度與癌組織標(biāo)本中的GPX3蛋白表達(dá)均與患者年齡、性別和腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)情況、TNM分期無關(guān)，而與淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，進(jìn)