帕金森病家系GDNF基因啟動子測序及其CpG島甲基化分析.pdf

1、目的：探討GDNF基因啟動子的變異或其CpG島的異常甲基化與PD家系中PD發(fā)病的關系。
　　 方法：從PD家系成員的外周血中提取全血DNA，應用引物設計軟件針對第一啟動子設計2對引物和3組甲基化和非甲基化引物，第二啟動子區(qū)及第二外顯子區(qū)設計1對引物和4組甲基化和非甲基化引物；應用聚合酶鏈反應(PCR)進行GDNF基因2個啟動子擴增，并用基因測序技術進行測序，然后應用DNAstar軟件進行序列變異分析。采用甲基化特異性PCR(MS

2、P)技術擴增2個啟動子區(qū)及第二外顯子區(qū)的甲基化和非甲基化產(chǎn)物，并用瓊脂糖凝膠電泳觀察GDNF基因2個啟動子區(qū)及第二外顯子區(qū)CpG島的甲基化情況。
　　 結果：GDNF基因第一個啟動子區(qū)發(fā)現(xiàn)了2個變異位點，是目前已知的多態(tài)位點，即rs2975100(3738C＞T)和rs2075680(4141G＞T)，這2個多態(tài)位點不位于轉錄結合區(qū)；而第二個啟動子區(qū)未發(fā)現(xiàn)變異。GDNF基因2個啟動子區(qū)及第二外顯子區(qū)的CpG島上無異常甲基化。