Evn-50對人乳腺癌MCF-7耐三苯氧胺細(xì)胞株生長和凋亡的影響.pdf

1、目的:乳腺癌是婦女中最常見的惡性腫瘤,嚴(yán)重影響女性健康和生活質(zhì)量。三苯氧胺能夠提高乳腺癌雌激素受體陽性患者的無病生存率和整體生存率,降低局部復(fù)發(fā)和同側(cè)復(fù)發(fā),在臨床上應(yīng)用廣泛。近年來出現(xiàn)的三苯氧胺耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重限制了其療效,是目前臨床上的亟待解決的主要問題。研究證實(shí)來自黃荊果實(shí)的乙酸乙酯提取物Evn-50具有廣譜抗腫瘤活性,可以抑制乳腺癌細(xì)胞在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞的生長和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)通過研究Evn-50在體外對人乳腺癌MCF-7和MCF

2、-7/TAM-R細(xì)胞株的生長和凋亡的影響,探索Evn-50對乳腺癌TAM耐藥細(xì)胞的作用及其作用機(jī)制,為以后進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用提供初步依據(jù)。
　　 方法:持續(xù)用5uM的TAM誘導(dǎo)內(nèi)分泌治療敏感的野生型人乳腺癌MCF-7細(xì)胞構(gòu)建MCF-7/TAM-R細(xì)胞系;將每個細(xì)胞系分成四個亞組,分別加DMSO、5uMTAM、5uM TAM+50ug/ml Evn-50和50ug/ml Evn-50處理細(xì)胞;用MTT法測定細(xì)胞的活力和細(xì)胞

3、存活率,用PI單染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率及G2/M期細(xì)胞比例,用免疫蛋白印記法觀察Evn-50在對TAM耐藥細(xì)胞株生長和凋亡影響中的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果:正常MCF-7細(xì)胞與MCF-7/TAM-R細(xì)胞相比,前者加入TAM后顯微鏡下可見明顯的細(xì)胞碎片,其生長呈明顯下降趨勢,應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞存活率,可以觀察到加入TAM72h后正常MCF-7細(xì)胞的存活率較耐藥組細(xì)胞明顯降低,有顯著性差異(**p＜0.01)。Evn-50單藥或

4、與TAM聯(lián)合均可以抑制MCF-7、MCF-7/TAM-R的細(xì)胞活力并降低其細(xì)胞存活率,且兩藥聯(lián)合時的作用更為明顯,與control組和TAM組比較有顯著性差異(**p＜0.01,*p＜0.05)。在Evn-50單藥或與TAM聯(lián)合均對MCF-7和MCF-7/TAM-R細(xì)胞的凋亡有明顯影響,且隨著作用時間的延長,細(xì)胞凋亡逐漸增多,在72h時,細(xì)胞凋亡率和G2期細(xì)胞比例的顯著性差異最為明顯(**p＜0.01)。Western Blot結(jié)果提示

5、TAM和Evn-50單獨(dú)或聯(lián)合處理MCF-7細(xì)胞后,磷酸化AKT(Ser473)和p-MAPK44/42蛋白水平下調(diào),而總AKT和MAPK44/42蛋白水平無變化。提示Evn-50可能通過下調(diào)AKT和MAPK信號通路來抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增長。而對MCF-7/TAM-R細(xì)胞,Evn-50與TAM單獨(dú)使用,對磷酸化AKT(Ser473)和p-MAPK44/42蛋白水平均無明顯影響,當(dāng)兩藥聯(lián)合使用時則具有降低磷酸化AKT(Ser473