S100A14-siRNA對(duì)乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 TaxR凋亡和耐藥的影響.pdf

1、目的：
　　應(yīng)用人工合成S100A14-siRNA干擾乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 TaxR細(xì)胞內(nèi)S100A14基因的表達(dá)，同時(shí)聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)，觀察S100A14-siRNA對(duì)乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 TaxR凋亡和耐藥的影響，為乳腺癌新輔助化療中紫杉醇耐藥的基因治療提供新思路。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)普通乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 TaxR，并將兩種細(xì)胞株分別分為三組：

2、r>　?、倏瞻讓?duì)照組（DMSO）；
　?、陉幮詫?duì)照組（Scramble-siRNA）；
　?、蹖?shí)驗(yàn)組（S100A14-siRNA）。
　　1.應(yīng)用western blot檢測(cè)正常乳腺細(xì)胞株MCF-10、普通乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 TaxR細(xì)胞內(nèi)S100A14的蛋白表達(dá)情況。
　　2.人工合成S100A14-siRNA，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染MCF-7、MCF-7 TaxR細(xì)胞，應(yīng)用wester

3、n blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染S100A14-siRNA對(duì)細(xì)胞內(nèi)S100A14蛋白表達(dá)水平的影響。
　　3.轉(zhuǎn)染siRNA后，聯(lián)合應(yīng)用不同濃度的紫杉醇培養(yǎng)MCF-7 TaxR48 h，應(yīng)用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性變化情況。
　　4.應(yīng)用倒置相差顯微鏡、Hoechst33342熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)（AnnexinV-FITC/PI雙染法）檢測(cè)MCF-7 TaxR轉(zhuǎn)染 siRNA后，聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。
　

4、　5.應(yīng)用western blot檢測(cè)MCF-7 TaxR轉(zhuǎn)染siRNA后，聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞中線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白的影響。
　　結(jié)果：
　　1.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7 TaxR中S100A14蛋白表達(dá)量明顯高于紫杉醇敏感細(xì)胞MCF-7和乳腺正常細(xì)胞MCF-10，組間兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染siR

5、NA48 h后，MCF-7和MCF-7 TaxR的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)S100A14的蛋白表達(dá)量與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比明顯減少，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　3.MCF-7 TaxR轉(zhuǎn)染siRNA后，聯(lián)合不同濃度的紫杉醇培養(yǎng)48 h，MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，MCF-7 TaxR的陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞存活率隨紫杉醇濃度的升高均有下降的趨勢(shì)，但同一濃度下實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞存活率明顯低于陰性對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.0

6、5）。
　　4.MCF-7 TaxR轉(zhuǎn)染siRNA后，聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)48 h，倒置相差顯微鏡觀察顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞大量死亡；Hoechst33342熒光染色顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核僅剩少量高度凝集縮小、呈亮藍(lán)色染色的核碎片；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，MCF-7 TaxR空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞早期凋亡率分別為（9.11±2.01）％、（11.45±1.09）%、（13.14±1.87）%，晚期凋亡率分別為（8.01±1.63）%

7、、（7.54±0.99）%、（72.12±2.47）%，總凋亡率分別為（17.12±3.67）%、（18.99±2.29）%、（85.26±5.01）%，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的早期、晚期、總凋亡率均明顯高于兩對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5.MCF-7 TaxR轉(zhuǎn)染siRNA后，聯(lián)合紫杉醇培養(yǎng)48 h，western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與兩對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白表達(dá)量下調(diào)，Bid、Ba

8、x、活化caspase-9、活化caspase-7和活化PARP蛋白表達(dá)量上調(diào)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.S100A14的高表達(dá)與乳腺癌紫杉醇耐藥相關(guān)。
　　2.S100A14-siRNA可有效轉(zhuǎn)染乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞MCF-7 TaxR并沉默S100A14的蛋白表達(dá)。
　　3.沉默S100A14可提高M(jìn)CF-7 TaxR細(xì)胞對(duì)化療藥物紫杉醇的敏感性，逆轉(zhuǎn)紫杉醇耐藥。