乳腺癌MCF-7耐放射細胞亞株的建立及其抗拒機制的研究.pdf

1、目的：乳腺癌放射治療的個體差異性較大，常出現放療抵抗的情況。研究乳腺癌放療抵抗現象發(fā)生的分子生物學機制對于逆轉腫瘤細胞的耐放射性、提高放療效果具有非常重要的意義。本實驗探索誘導并建立人乳腺癌耐放射細胞亞株的體外實驗方法及其放射抗拒性的初步機制。
　　方法:以人乳腺癌MCF-7細胞株為實驗對象，通過體外細胞培養(yǎng)，應用X-射線對人乳腺癌細胞株MCF-7進行梯度遞增的誘導照射，得到MCF-7耐放射細胞亞株：MCF-7R。隨后觀察其細胞形

2、態(tài)學、細胞周期與凋亡及放射敏感性的變化，并與乳腺癌親本株MCF-7比較。掃描電鏡和透射電鏡對比觀察親本株與耐放射細胞亞株細胞內部的超微結構；流式細胞儀(flow cytometry, FCM)FCM檢測其細胞周期與凋亡；集落形成實驗檢測其放射敏感性，并計算存活分數，單擊多靶模型擬合細胞存活曲線。以6GyX-射線分別照射親本株 MCF-7與耐放射細胞亞株 MCF-7R，Western blot法分別檢測MCF-7，MCF-7R，MCF-7

3、+6Gy，MCF-7R+6Gy4組的pAkt、HIF-1α蛋白表達，探討乳腺癌產生放射抗拒性的初步機制。
　　結果：⑴電鏡學顯示耐放射細胞亞株MCF-7R外形及細胞器均出現明顯改變。⑵細胞周期分布結果顯示：G0/G1期百分比由52.81±0.14升高至57.65±1.09(p<0.01)；S期百分比由33.39±0.12降低至32.92±0.04(p<0.05)；G2/M期百分比明顯下降，由13.32±0.2降到9.43±0.11

4、，統(tǒng)計學上有顯著差異(p<0.01)；凋亡率由2.03±0.22升到7.35±0.41(p<0.01)。⑶準域劑量Dq值由2.261升高至3.695(p<0.05)；平均致死劑量Do值由1.215升高至1.834(p<0.05)；照射2Gy時細胞存活分數SF2值（由0.62升到0.96），增高34％，統(tǒng)計學上有顯著差異(p<0.001)。⑷Western blot法檢測結果顯示：MCF-7R組pAkt、HIF-1α蛋白的表達高于親本株M

5、CF-7，差異有統(tǒng)計意義(p<0.05)；MCF-7R+6Gy組分別與MCF-7組、MCF-7R、MCF-7+6Gy比較，前者的pAkt、HIF-1α蛋白表達明顯增高（P<0.01），而MCF-7與MCF-7+6Gy組相比較二者pAkt、HIF-1α蛋白表達差別無顯著性（P>0.05）。
　　結論：①小劑量梯度增加照射誘導法能較好地建立MCF-7R乳腺癌耐放射細胞亞株。②乳腺癌耐放射機制與PI3K/Akt通路相關聯(lián)，并可能通過PI