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文檔簡介
1、第一部分鼻飼熱休克蛋白60對動脈粥樣硬化形成及進(jìn)展的影響
目的:研究HSP60經(jīng)鼻給藥后對動脈粥樣硬化的形成及發(fā)展的影響,為臨床應(yīng)用抗原誘導(dǎo)免疫耐受治療慢性炎性免疫性疾病提供依據(jù)。
方法:將6周齡的ApoE-/-雄性小鼠隨機(jī)分為HSP60組和PBS組,HSP60組與PBS組再分別隨機(jī)分為7周齡給藥組(早期組)和16周齡給藥組(晚期組)。HSP60組ApoE-/-小鼠經(jīng)鼻給予HSP60,對照組經(jīng)鼻給予PBS,在16周齡
2、或24周齡時,冰凍切片后,用HE和油紅O染色法觀察處理組和對照組小鼠主動脈根部粥樣斑塊的面積大小,比較兩者之間是否有統(tǒng)計學(xué)差異。
結(jié)果:對于7周齡時給藥的ApoE-/-小鼠,在16周齡時,HSP60組小鼠較PBS對照組小鼠其主動脈根部斑塊面積明顯減少,達(dá)53.7%之多(226432±29676μm2vs489250±31339μm2;P<0.01)。而對于10周齡時給藥ApoE-/-小鼠,在24周齡時,HSP60組小鼠與PBS
3、對照組小鼠主動脈根部粥樣斑塊面積無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(845917±61180μm2vs800685±39654μm2;P>0.05)。
結(jié)論:經(jīng)鼻給予HSP60可降低ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化的形成,而對動脈粥樣硬化的進(jìn)展似乎沒有明顯抑制作用,且短暫給予HSP60后能保持長期的動脈粥樣硬化抑制效果(至少10周),為臨床上提供了一種潛在的動脈粥樣硬化治療方法。
第二部分鼻飼熱休克蛋白60抑制動脈粥樣硬化的潛在機(jī)制
4、r> 目的:研究經(jīng)鼻給予HSP60誘導(dǎo)免疫耐受減少動脈粥樣硬化形成的機(jī)制,探討Treg細(xì)胞及細(xì)胞因子TGF-β在免疫耐受誘導(dǎo)中的作用。
方法:6周齡ApoE-/-雄性小鼠高質(zhì)飲食一周后經(jīng)鼻給予HSP60或PBS作為對照,鼻飼后第4天和第14天,應(yīng)用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測ApoE-/-小鼠頸部淋巴結(jié)(CLNs)和脾臟中CD4+LAP+和CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的數(shù)量及組成比例;ELISA被用于鼻飼后第4天、第14
5、天和第8周細(xì)胞因子TGF-β及INF-γ等水平的測定;鼻飼后8周,用Real-time PCR實驗方法測定ApoE-/-小鼠主動脈斑塊內(nèi)TGF-β、INF-γ、CD25、Foxp3、MCP-1等細(xì)胞因子的水平。
結(jié)果:流式細(xì)胞學(xué)發(fā)現(xiàn)鼻飼后4天,小鼠脾臟和CLNs中CD4+CD25-LAP+T細(xì)胞占所有CD4+T細(xì)胞的百分比在HSP60與PBS兩組間沒有顯著差異,但是,鼻飼后14天,觀察到HSP60處理組小鼠脾臟和CLNs中CD
6、4+CD25-LAP+T細(xì)胞占所有CD4+T細(xì)胞的百分比較PBS處理組小鼠有明顯升高(P<0.01);ELISA發(fā)現(xiàn)鼻飼后4天,14天和8周三個時間點,HSP60組小鼠CLNs的TGF-β水平較PBS組都有明顯升高(P<0.01),鼻飼后8周INF-γ水平HSP60處理組小鼠較PBS處理組小鼠有顯著性降低(P<0.05);Real-time PCR發(fā)現(xiàn)HSP60處理組兩種炎性標(biāo)志物MCP-1和INF-γ的表達(dá)較對照組有明顯降低(P<0.
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