類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TGF-β-Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路檢測(cè)及其臨床意義的研究.pdf

1、研究目的：建立檢測(cè)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中TGF-β/Smad（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β/Smad）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)因子的表達(dá)水平的實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法，評(píng)價(jià)TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)因子在RA中的表達(dá)水平，及其在疾病的發(fā)生、發(fā)展、歸轉(zhuǎn)等方面的臨床意義；并探索其在RA中醫(yī)證候分型中的作用，為研究RA的發(fā)病機(jī)制及治療提供新的理論根據(jù)。 研究方法：采用套式實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Nested-Real-T

2、ime-PCR）及普通實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Conventional-Real-time-PCR）的方法，檢測(cè)人PBMC中TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7mRNA表達(dá)水平。提取PBMC中的RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA作為PCR模板，根據(jù)TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7基因序列設(shè)計(jì)引物，用SYBR GreenⅠ熒光染料摻入法作Real-Time-PCR，檢測(cè)人PBMC中TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7 mRNA的表達(dá)水平。

3、 研究結(jié)果：通過檢測(cè)58例RA患者與29例健康人群對(duì)照組PBMC中的TGF-βRⅡ、Smad4、Smad7mRNA表達(dá)水平及其Smad4/Smad7比值，RA患者組中的TGF-βRⅡ、Smad4、Smad4/Smad7比值比健康人群對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；Smad7mRNA的表達(dá)水平與健康人群對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。將RA患者的不同臨床分期和治療前后的TGF-βRⅡ、Smad4mRNA表達(dá)水平及Sma

4、d4/Smad7比值作比較，RA活動(dòng)期高于非活動(dòng)期，治療前高于治療后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；將R患者關(guān)節(jié)功能不同分級(jí)的TGF-βRⅡ、Smad4mRNA表達(dá)水平及Smad4/Smad7比值作比較，Ⅲ級(jí)以上高于Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)，差異顯箸（P<0.01），Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)相比（P>0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在RA各中醫(yī)證型分組比較中，TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7 mRNA的表達(dá)水平之間沒有差異；但Smad4/Smad7比值對(duì)中醫(yī)證

5、型分組有一定意義，在濕熱痹阻和肝腎虧虛兼痰瘀痹阻組與寒濕痹阻組比較中，Smad4/Smad7比值升高，有顯著性差異。并將相關(guān)因子作相關(guān)性分析，Smad4與TGF-βRⅡ、Smad4/Smad7比值呈正相關(guān)（r值分別為0.262，0.268，P1<0.05，P2<0.05），TGF-βRⅡ與Smad4的表達(dá)高峰期均在病程的5-10年。 研究結(jié)論：RA患者PBMC中的TGF-βRⅡ、Smad4mRNA表達(dá)水平及Smad4/Smad7