IL-21RmRNA在類風濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個核細胞中的表達水平及其檢測意義研究.pdf

1、目的：建立檢測類風濕關(guān)節(jié)炎患者（rheumatoid arthritis，RA）外周血單個核細胞（PBMC）中IL-21RmRNA的套式實時熒光定量PCR（Nested-Real-Time-PCR）的方法，（1）研究IL-21RmRNA在RA PBMC中的表達水平并探討其臨床意義；（2）探討IL-21RmRNA在RA骨破壞中的作用，進一步揭示RA的發(fā)病機制；（3）探討IL-21RmRNA與RA患者血清中IL-21（interleukin

2、-21）含量及外周血CD4+CD25+T淋巴細胞數(shù)量的相關(guān)性；（4）探討IL-21RmRNA在RA患者中醫(yī)不同證型中的表達水平及其檢測意義。 方法：根據(jù)IL-21RmRNA序列，跨內(nèi)含子設(shè)計外引物，采用套式實時熒光定量PCR方法。首次擴增以增加原始模板濃度，并以減少引物、酶的濃度及循環(huán)次數(shù)的方法保持擴增片段的特異性，再以首次擴增產(chǎn)物為模板，進行二次PCR擴增作實時熒光定量（Real-Time-PCR）檢測，同時以β-actin作

3、內(nèi)參；以二者比值作為IL-21RmRNA表達水平的指標。同時采用競爭性酶聯(lián)免疫吸附法（ELISE）測定RA患者血清中IL-21的含量，流式細胞術(shù)檢測EDTA-K2抗凝外周血中CD4+CD25+T淋巴細胞數(shù)量。 結(jié)果：PCR擴增片段經(jīng)測序分析證實為IL-21RmRNA的特異性目的片段。Ct值和模板起始濃度對數(shù)值之間具有良好的線性關(guān)系；檢測最低濃度可達101拷貝。ELISA法測RA患者血清中IL-21的含量，相關(guān)系數(shù)為0.9984。

4、60例RA患者與30例健康人群相比，RA患者組基因IL-21RmRNA表達水平及血清中IL-21含量上調(diào)，經(jīng)統(tǒng)計學分析具有顯著差異（P<0.01）。將R患者關(guān)節(jié)功能分級組別作IL-21RmRNA及IL-21表達水平比較；Ⅰ級、Ⅱ級相比兩者均無顯箸差異（P>0.05），Ⅰ級、Ⅱ級分別與Ⅲ級以上相比，差異均顯著（P<0.01）。RA活動期IL-21RmRNA及IL-21水平均較非活動期增高，RA患者經(jīng)治療后兩者的表達水平均明顯下調(diào)；治療前后

5、比較均具有顯著差異（P<0.01）。中醫(yī)證型之間兩兩比較均沒有顯著性差異。將60例RA患者PBMC中IL-21RmRNA的表達水平與血清中IL-21含量及外周血CD4+CD25+T淋巴細胞數(shù)量作Pearson相關(guān)分析，IL-21RmRNA表達水平與血清中IL-21的含量顯著相關(guān)，而與外周血CD4+CD25+T淋巴細胞數(shù)量無相關(guān)性。 結(jié)論：RA患者IL-21RmRNA及IL-21的表達水平均顯著上調(diào)，兩者表達水平和RA疾病嚴重程度