基質(zhì)金屬蛋白酶-1基因多態(tài)性與特發(fā)性肺纖維化相關(guān)性的研究.pdf

1、特發(fā)性肺纖維化是一種慢性致命性、以肺部組織異常重塑為特征的間質(zhì)性肺部疾病。其病因不明，目前認(rèn)為是環(huán)境因素與多種遺傳因素相互作用可能參與其疾病的發(fā)展?；|(zhì)金屬蛋白酶-1其主要作用是降解細(xì)胞外基質(zhì)成份，認(rèn)為其在肺纖維化的形成中起了重要作用。近年來(lái)研究顯示MMP-1具有基因多態(tài)性現(xiàn)象，其與哮喘、慢性阻塞型肺疾病、肺結(jié)核等多種肺疾病之間的易感性已有報(bào)道。而國(guó)內(nèi)尚無(wú)關(guān)于MMP-1基因多態(tài)性與特發(fā)性肺纖維化的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)研究基質(zhì)金屬蛋白

2、酶-1(Matrix metalloproteinase-1)啟動(dòng)子區(qū)-1607位點(diǎn)1G/2G單核苷酸基因多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)與中國(guó)河北地區(qū)漢族特發(fā)性肺纖維化的相關(guān)性，并探測(cè)特發(fā)性肺纖維化患者血清學(xué)MMP-1和TIMP-1的蛋白含量，探討中國(guó)河北地區(qū)漢族特發(fā)性肺纖維化患者的遺傳易感因素、發(fā)病機(jī)制及該位點(diǎn)基因多態(tài)性在不同種族特發(fā)性肺纖維化患者易感性方面的差異。
　　方法：采用

3、基于人群的病例.對(duì)照研究方法，參考2002年中華醫(yī)學(xué)會(huì)頒布的《特發(fā)性肺纖維化診斷和治療指南(草案)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取臨床上診斷為特發(fā)性肺纖維化(IPF)漢族患者84例，其中男性51例，女性33例，年齡43歲-88歲，平均(66.7±9.5)歲，且除外繼發(fā)性肺纖維化、急性感染、腫瘤、栓塞、心衰、控制不良的糖尿病、消化性潰瘍、嚴(yán)重骨質(zhì)疏松、結(jié)核病患者。對(duì)照組：選取漢族健康體檢人群100例，其中男性53例，女性47例，年齡40歲-73歲，平

4、均年齡(50.2±7.5)歲，且既往無(wú)變態(tài)反應(yīng)性疾病病史，近期無(wú)感染，無(wú)免疫抑制劑應(yīng)用史。采集IPF患者及健康對(duì)照組外周靜脈血5ml，其中2mlEDTA抗凝，以消化-苯酚-氯仿有機(jī)溶劑法和樹脂型TM基因組DNA提純?cè)噭┖刑崛⊥庵苎准?xì)胞DNA，利用限制性內(nèi)切酶ALUI，聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳的方法，檢測(cè)IPF患者和健康對(duì)照者M(jìn)MP-1基因啟動(dòng)子區(qū)-1607(1G/2G)多態(tài)性位點(diǎn)的基

5、因型和等位基因分布，分析兩組人群MMP-1基因型和等位基因頻率的差異。余3ml靜脈血促凝劑促凝，采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定IPF患者和健康對(duì)照組MMP-1和TIMP-1的血清蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1 MMP-1位點(diǎn)基因多態(tài)性分析1.1 MMP-1-1607的基因型本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)得到三種基因型：1G/1G型、1G/2G型及2G/2G型；其中1G/1G型為野生型，1G/2G型及2G/2G型為突變型。IPF

6、組與健康對(duì)照組均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡性檢驗(yàn)(P>0.05)，兩組之間具有良好的可比性。
　　1.2 MMP-1-16071G/2G各基因型在兩組間的分布情況IPF組84例中檢測(cè)出1G/1G基因型12例(14.3％)，1G/2G基因型30例(35.7％)，2G/2G基因型42例(50％)。健康對(duì)照組100例中檢測(cè)出1G/1G基因型11例(11％)，1G/2G基因型42例(42％)，2G/2G基因型47例(47％)

7、。MMP-1-1607位點(diǎn)各基因型在兩組間的分布頻率比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=0.940，P>0.05)。
　　1.3 MMP-1-1607位點(diǎn)1G/2G各等位基因頻率在兩組間的分布情況IPF組84例中1G等位基因頻率為32.1％，2G等位基因頻率為67.9％，健康對(duì)照組100例中1G等位基因頻率為32％，2G等位基因頻率為68％。MMP-1-1607位點(diǎn)的各等位基因在兩組間的分布頻率比較無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(x2=0.001，P

8、>0.05)。
　　2血清MMP-1，TIMP-1蛋白濃度的變化2.1血清MMP-1蛋白濃度變化：
　　IPF患者與健康對(duì)照組MMP-1血清蛋白濃度分別為：374.66±54.18ng/ml，97.45±20.39 ng/ml。IPF患者血清MMP-1蛋白濃度明顯高于健康對(duì)照組，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.2血清TIMP-1蛋白濃度變化：
　　IPF組與健康對(duì)照組TIMP-1血清蛋白濃度分別為

9、：111.10±26.70ng/ml，40.75±11.46 ng/ml。IPF患者血清TIMP-1蛋白濃度較健康對(duì)照組明顯升高，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.3用MMP-1/TIMP-1蛋白濃度得出兩者的比值IPF組與健康對(duì)照組MMP-1/TIMP-1比值分別為：3.39±1.06，2.72±1.00，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.結(jié)合本研究推測(cè)MMP-1-1607位點(diǎn)