延邊黃牛D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗原提純及分析.pdf

1、產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌（Clostridium perfringens）是一種梭狀芽孢屬條件性致病菌，廣泛分布于自然界，遍布世界各地，同時也是腸道中的常在菌群之一，在一定條件下，可引起相關(guān)的各種嚴(yán)重疾病。吉林省延邊地區(qū)是產(chǎn)氣莢膜梭菌病的高發(fā)區(qū)，導(dǎo)致延邊黃牛猝死頻繁發(fā)生，對延邊黃牛的危害極為嚴(yán)重，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　本試驗(yàn)為研究延邊黃牛 D型產(chǎn)氣莢膜梭菌的抗原特性，提取經(jīng)純培養(yǎng)的D型產(chǎn)氣莢膜梭菌菌體及其分泌的毒素，菌體經(jīng)超聲波裂

2、解制備成粗提體抗原，毒素經(jīng)飽和硫酸銨處理制備成粗提分泌抗原，再分別經(jīng)過Sephadex G-200分離純化后，應(yīng)用十二烷基硫酸鈉-聚炳烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）及免疫印跡（Western blotting）對D型產(chǎn)氣莢膜梭菌粗提及純化的體抗原和分泌抗原進(jìn)行反應(yīng)原性分析。結(jié)果表明，D型產(chǎn)氣莢膜梭菌的體抗原有四條主要蛋白帶，其分子量分別為176kD、140kD、116kD、100kD，其中特異性蛋白分子量為140kD；分泌抗原有三條

3、蛋白帶，其中特異性蛋白分子量為43kD、35kD。
　　將純化的特異性菌體及分泌抗原加入佐劑，免疫小鼠（0.1mg/只），并設(shè)對照組，利用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP），對純化的特異性蛋白抗原進(jìn)行免疫原性分析。結(jié)果顯示，特異性菌體抗原產(chǎn)生的抗體效價最高達(dá)到1:64，比全菌抗原產(chǎn)生的效價高；特異性分泌抗原產(chǎn)生的抗體效價最高達(dá)到1:32，比細(xì)菌培養(yǎng)上清液產(chǎn)生的效價高。說明純化的特異性抗原具有良好的免疫原性。
　　本研究確定了延邊黃牛D型