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文檔簡介
1、近年來,我國許多兔場頻繁爆發(fā)兔腹瀉性腸炎,主要由A型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的一種腸道疾病,給兔養(yǎng)殖戶造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。該病發(fā)病迅速,死亡率高,所以對該病的預(yù)防工作至關(guān)重要。本試驗(yàn)建立的A型產(chǎn)氣莢膜梭菌的感染模型,不僅為產(chǎn)氣莢膜梭菌病有關(guān)疫苗的效力檢驗(yàn);抗毒素血清的治療效果評價提供了感染模型,還為評估菌株的毒力,產(chǎn)氣莢膜梭菌的致病機(jī)制研究提供參考。
通過細(xì)菌的分離培養(yǎng),染色涂片鏡檢,分離純化,生化實(shí)驗(yàn)及多重PCR初步診斷臨床病例中分
2、離的產(chǎn)氣莢膜梭菌基因型為A型。從臨床發(fā)病兔的肝臟共分離出4株A型產(chǎn)氣莢膜梭菌,和參考菌株NCTC528經(jīng)過菌種的復(fù)蘇、增菌和產(chǎn)毒素培養(yǎng),所產(chǎn)毒素進(jìn)行卵磷脂酶活性實(shí)驗(yàn)和小鼠LD50的測定和比較。在相同的產(chǎn)毒條件下得到產(chǎn)毒效果比較好的菌株(濟(jì)寧株1)。
NCTC528和濟(jì)寧株1菌株經(jīng)過重新復(fù)蘇、增菌和產(chǎn)毒,所得的培養(yǎng)物用于感染家兔。培養(yǎng)物通過不同處理方式、不同感染方式接種2kg健康家兔,研究結(jié)果表明:腹腔注射NCTC528除菌毒素
3、(小鼠LD50:24.25;卵磷脂酶活性:24)可在6-8小時致死家兔;最小致死劑量是3ml;肌肉注射528除菌毒素(小鼠LD50:24.25;卵磷脂酶活性:24)的最小致死劑量是4ml;肌肉注射全菌液(小鼠LD50:25.25;毒素卵磷脂酶活性:25,細(xì)菌濃度1.3×109cfu/ml)最小致死量是5ml,對腹腔和肌肉注射的感染死亡兔進(jìn)行剖檢病變和組織病理學(xué)病變的觀察,病變主要特征是:腹腔和肌肉注射除菌毒素都出現(xiàn)了胃黏膜脫落和小腸黏膜
4、彌散性出血現(xiàn)象;但胃粘膜有潰瘍灶,盲腸漿膜面有出血病變少見。
分別以培養(yǎng)物(細(xì)菌濃度1.3×109 cfu/ml,卵磷脂酶活性效價25),30ml,40ml,50ml灌服2kg家兔,并飼喂不同飼料配方飼料,僅見短期腹瀉,未見死亡。2Kg家兔回腸注射感染全菌液(細(xì)菌濃度1.6×108 cfu/ml,卵磷脂酶活性為24)5ml、8ml、10ml。部分兔出現(xiàn)腹瀉死亡,不能穩(wěn)定復(fù)制病變,血常規(guī)監(jiān)測發(fā)現(xiàn):攻毒后一周淋巴細(xì)胞比率、血小板總
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