我國(guó)部分地區(qū)蛋雞產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素型調(diào)查及恩拉霉素對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌抑菌作用研究.pdf

1、產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)，又稱(chēng)魏氏梭菌(Clostridium welchii)，是一種梭狀芽孢菌屬條件性致病菌，在自然界分布非常廣，可引起各種動(dòng)物壞死性腸炎、腸毒血癥，同時(shí)也是人畜創(chuàng)傷性氣性壞疽及人類(lèi)食物中毒的主要病原菌之一，該菌的致病因子是其所產(chǎn)生的外毒素。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)的外毒素有12種(α、β、γ、η、δ、ε、ι、θ、κ、λ、μ和ν)之多，但起主要致病作用的毒素只有4種，即α、β、ε和ι，

2、根據(jù)這4種主要致死性毒素與其抗毒素的中和試驗(yàn)，可將該菌分為A、B、C、D、E5個(gè)毒素型。本研究通過(guò)使用多重PCR對(duì)覆蓋全國(guó)范圍的14個(gè)省、市、自治區(qū)蛋雞場(chǎng)樣品進(jìn)行檢測(cè)了解全國(guó)各地養(yǎng)雞場(chǎng)中產(chǎn)氣莢膜梭菌流行狀況，獲取不同地區(qū)產(chǎn)氣莢膜梭菌主要流行的毒素型，為后期疾病流行及調(diào)查備份重要資料。并通過(guò)與某公司的合作，了解恩拉霉素對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌的抑制特點(diǎn)，給藥物的研發(fā)提供重要數(shù)據(jù)。本研究分為三個(gè)部分:
　　 規(guī)模化蛋雞場(chǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離:<

3、br>　　 通過(guò)從山東、河北、北京等覆蓋全國(guó)的14省、市、自治區(qū)的31個(gè)規(guī)?；半u場(chǎng)進(jìn)行糞便和腸道樣品的采樣對(duì)規(guī)模化蛋雞場(chǎng)雞群進(jìn)行產(chǎn)氣莢膜梭菌的流行現(xiàn)狀普查，共采集390份新鮮糞便和腸道樣品，選取疑似菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，按常規(guī)方法進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)初步鑒定共分離得到產(chǎn)氣莢膜梭菌40株，檢出率為10.26％，低于國(guó)外相關(guān)報(bào)道的分離率。
　　 產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素型分析:
　　 參照已發(fā)表文獻(xiàn)對(duì)α、β、ε、ι、β2和腸毒素六種毒素根據(jù)

4、三步PCR檢測(cè)體系分別對(duì)cpa、cpb2、etx、iap的四基因進(jìn)行multi—PCR，及cpb和cpe的單基因PCR檢測(cè)。最終得到其中一株擴(kuò)增出196bp和325bp兩條條帶其余均只有325bp—條條帶，因此得到只有一株C型菌其余39株均為A型菌。通過(guò)對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素型的分析可以了解各地產(chǎn)氣莢膜梭菌分布，為流行病學(xué)調(diào)查和診斷提供了重要依據(jù)。恩拉霉素對(duì)比抑菌實(shí)驗(yàn):
　　 本實(shí)驗(yàn)主要使用某公司生產(chǎn)的恩拉霉素產(chǎn)品與同種產(chǎn)品不同批次

5、生產(chǎn)的產(chǎn)品進(jìn)行比較，對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，從而獲得恩拉鼎對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌的抑菌特點(diǎn)，并通過(guò)不同時(shí)期產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比，確定試驗(yàn)結(jié)果。通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出恩拉鼎從0.01μg/ml便可以對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌進(jìn)行較強(qiáng)的抑制，當(dāng)達(dá)到0.1ug/ml濃度以后抑菌效果會(huì)出現(xiàn)降低現(xiàn)象，0.5ug/ml以后隨著藥物濃度增大抑菌效果重新增強(qiáng)，在實(shí)驗(yàn)室條件下呈現(xiàn)一個(gè)曲線(xiàn)抑菌效果，經(jīng)過(guò)使用某公司提供的恩拉鼎與不同批次產(chǎn)品在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌抑菌能力和特點(diǎn)基本相同，