銀杏外種皮多糖的分離純化及活性研究.pdf

1、銀杏是世界上珍貴的藥用植物之一，其葉、果和外種皮等皆具有藥用開發(fā)價(jià)值，被稱為“全身都是寶的活化石”。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國銀杏種植已遍及全國27個(gè)省（市），年產(chǎn)銀杏白果1.2萬噸以上，而外種皮部分約占整個(gè)銀杏果實(shí)的70％，據(jù)此估計(jì)我國每年至少有3萬噸以上新鮮銀杏外種皮，若除去其中60％的水分，干銀杏外種皮每年超過1.2萬噸。由銀杏葉開發(fā)而成的銀杏提取物(EGb)及其制劑是目前深受人們歡迎的天然藥物之一，由白果開發(fā)而成的各種營養(yǎng)食品也很多，唯有

2、銀杏外種皮開發(fā)利用率低。
　　 多糖是一重要的生物活性成分。研究報(bào)道銀杏外種皮水提多糖具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和抗衰老等多種活性，因此，研究開發(fā)農(nóng)業(yè)廢棄物銀杏外種皮，則能變廢為寶，綜合利用銀杏資源。本論文以銀杏外種皮為原料，研究了銀杏外種皮多糖的提取工藝及含量測(cè)定方法、銀杏外種皮多糖的純化技術(shù)、粗多糖和脫蛋白多糖的免疫活性和純多糖及其乙?；a(chǎn)物的抗腫瘤活性，主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1.研究了水提法提取銀杏外種皮多糖的

3、工藝條件。以銀杏外種皮多糖的提取率為考察指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用三因素三水平正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選了提取工藝，得最佳提取工藝條件為：溫度100℃、料液比1:12、時(shí)間1h和提取次數(shù)3次，在該工藝條件下多糖的提取率達(dá)95.09％；三因素對(duì)銀杏外種皮多糖提取率的影響次序?yàn)榻釡囟龋緯r(shí)間＞料液比。
　　 2.研究了苯酚-硫酸法測(cè)定銀杏外種皮多糖含量的方法。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用三因素三水平正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選了測(cè)定條件，得到最佳測(cè)定條件為

4、：5％的苯酚溶液1.2mL、硫酸用量4mL、顯色溫度30℃和顯色時(shí)間20min，硫酸用量是影響顯色的重要因素。該方法的加樣回收率為99.60％，RSD=3.02％(n=5)。
　　 3.研究了銀杏外種皮粗多糖(GBEP-1)和脫蛋白多糖(GBEP-2)的免疫活性。結(jié)果表明GBEP-1小劑量組、GBEP-2小劑量組的吞噬百分?jǐn)?shù)、吞噬指數(shù)與模型組均沒有顯著性差異，而GBEP-1大劑量組、GBEP-2大劑量組的吞噬百分?jǐn)?shù)、吞噬指數(shù)與模

5、型組有顯著差異（p＜0.05或p＜0.01）。GBEP-1、GBEP-2給藥組的吞噬百分?jǐn)?shù)、吞噬指數(shù)都有進(jìn)一步增強(qiáng)的趨勢(shì)，并具有一定的量效關(guān)系；GBEP-1、GBEP-2小劑量組的溶血素水平與模型組沒有顯著的差異，而GBEP-1、GBEP-2大劑量組的溶血素水平與模型組有較大顯著差異(p＜0.001)。隨著劑量的增加，GBEP-1、GBEP-2給藥組的血清溶血素抗體水平都有進(jìn)一步增大的趨勢(shì)，并具有一定的量效關(guān)系；GBEP-1小劑量組、G

6、BEP-1大劑量組和GBEP-2小劑量組對(duì)于胸腺指數(shù)與模型組無顯著差異，GBEP-1大劑量組、GBEP-1大劑量組、GBEP-2小劑量組、GBEP-2大劑量組胸腺系數(shù)、脾臟系數(shù)與模型組均有顯著差異（p＜0.05或p＜0.01）。
　　 4.使用DEAE-52纖維素和葡聚糖凝膠G-100層析柱，對(duì)銀杏外種皮多糖進(jìn)行純化，得到了四個(gè)多糖組分GBEPP11，GBEPP22，GBEPP33和GBEPP44，純度分別為90.87％、95.

7、36％、92.57％和94.63％；同時(shí)采用高效液相色譜法(HPLC)和氣相色譜法(GS)法測(cè)定了分子量和單糖組成，得到四個(gè)組分的分子量分別為950604、311288、47987和3373，四個(gè)組分的單糖組成分別是：GBEPP11由鼠李糖、葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為16:10:0.96；GBEPP22由鼠李糖、葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為2.64:1:1.43；GBEPP33由鼠李糖、葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為37.01:1