臍血間充質(zhì)干細(xì)胞對PHA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：了解臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(LJCB-MSCs)對植物血凝素(PHA)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞(LCs)增殖的影響并與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)作比較；探討UCB-MSCs對PHA誘導(dǎo)的LCs增殖抑制實(shí)驗(yàn)中的最佳細(xì)胞量效比；測定LJCB-MSCs各亞組轉(zhuǎn)化生長因子(rGF-β1)水平及肝素對UCB-MSCs分泌TGF-β1的影響。 方法：對培養(yǎng)的UCB-MSCs和BM-MSCs進(jìn)行形態(tài)、表型及功能方面的綜合鑒定；將不同細(xì)胞濃度的U

2、CB-MSCs和BM-MSCs加入由PHA誘導(dǎo)的LCs轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)體系中，MTT法測定各亞組對LCs的抑制率。用ELISA法測定上清液中的TGF-β1水平。 結(jié)果： (1)用密度梯度離心的方法從UCB和人BM中分離單個(gè)核細(xì)胞(MNC)，用貼壁法培養(yǎng)MSC，通過形態(tài)、表型及功能進(jìn)行綜合鑒定。培養(yǎng)至第3代的MSC具有長梭形的典型形態(tài)改變，表面分子檢測顯示高表達(dá)CDl66、CD29、CD54，低表達(dá)CDl3、CD34、CD45。經(jīng)體外誘導(dǎo)

3、可成為脂肪細(xì)胞。(2)MSCs：L,Cs為1：1、0.5：1、0.1：1、0.05：1、0.02：1、0.01：1時(shí)，LJCB-MSCs組對PHA刺激的L,Cs增殖均有抑制作用，抑制率分別為49.5±4.8、58.4±6.0、38.1±4.0、31.4±3.2、24.3±3.2、12.6±6.7；而BM-MSCs組抑制率隨BM-MSCs數(shù)量不同而異，分別為52.4±8.4、65.1±9.7、34.7±4.5、13.0±6.4、-10.7

4、±12.6、-43.9±9.4。UCB-MSCs組及BM-MSCs組在MSCs：LCs為0.05：1、0.02：1、0.01：l的三個(gè)亞組間對LCs的抑制率存在顯著差異(P<0.05)。IJCB-MSCs組抑制率強(qiáng)于BM-MSCs組。(3)當(dāng)IJCB-MSCs：L,Cs為0.75：1時(shí)抑制作用最強(qiáng)，與其他亞組比較有顯著差異(P<0.05)。(4)UCB-MSCs各亞組上清液中TGF-β1水平高于BM-MSCs組，呈細(xì)胞劑量依賴性；UCB

5、-MSCs組抑制率與TGF-β1水平相關(guān)性略小(r=0.85)，而BM-MSCs組抑制率與TGF-β1水平顯著相關(guān)(r=O.95)。(5)肝素為50、100、150、200U/ml時(shí)，可使UCB-MSCs分泌TGF-β1增高，分別為308．1 pg/ml、753.2 pg/ml、1148.9 pg/ml、643.3 pg/ml，肝素濃度為50u/ml能使UCB-MSCs對PHA誘導(dǎo)的LCs增殖的抑制作用明顯增強(qiáng)。 結(jié)論： UCB

6、與BM一樣在體外均可培養(yǎng)出MSC。UCB-MSCs對PHA誘導(dǎo)的LCs增殖有抑制作用，而BM-MSCs對LCs的作用則不衡定，在MSCs數(shù)量多時(shí)呈抑制作用，細(xì)胞減少時(shí)，作用開始不穩(wěn)定，繼續(xù)減少到一定數(shù)量時(shí)，有促LCs增殖作用。UCB-MSCs：LCs為0.75：1時(shí)，對LCs增殖抑制作用最強(qiáng)。UCB-MSCs與BM-MSCs均分泌TGF-β1，以UCB-MSCs組水平更高，BM-MSCs組免疫抑制作用與TGF-β1水平呈高度相關(guān)性，而U