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1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文X射線照射對臍血淋巴細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞活性的影響姓名:孫德宇申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師:李光20030401(Hyclone)洗滌2次,最后加入含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液,計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度。1(1)臍血淋巴細(xì)胞增殖的測量取已分離的單個核細(xì)胞,調(diào)至細(xì)胞濃度1Xi06/ml,以10彬IIlI刀豆蛋白A(ConA)刺激增殖,37℃,5%C02,飽和濕度條件下培養(yǎng)24小時。接受不同劑量(O25
2、Gy,O5Gy,1Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy,16Gy)x射線照射。照射后立即置于96孔培養(yǎng)板,取4個平行樣本,每孔加1001d,繼續(xù)培養(yǎng)56小時后加3H—TdR(1tLCi/孔)再培養(yǎng)8小時后用多頭細(xì)胞收集器收集細(xì)胞,置于49型玻璃纖維膜上,靜置過夜,將干燥的濾紙加入液爍瓶中,用Beckman液體閃爍計數(shù)器計數(shù)放射性核素每分鐘閃爍數(shù)(CPM值)。淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)用刺激指數(shù)(SI)評價,SI=實驗孔CPM均值/對照孔CPM均
3、值,通常SI/2即有意義。(2)臍血NK細(xì)胞活性的測量①取傳代培養(yǎng)48小時的K562細(xì)胞為靶細(xì)胞,臺盼藍(lán)拒染試驗測定細(xì)胞活力,應(yīng)達(dá)到98%以上。調(diào)整濃度1X106/ml,加入3H—TdR(10txCi/m1)37℃,5%C02,飽和濕度條件下培養(yǎng),孵育6小時,洗滌2次去除游離的3H—TdR,再制備成5X105/ml細(xì)胞懸液備用。②臍血單個核細(xì)胞洗滌2次后,調(diào)整細(xì)胞濃度為1107/ml作為效應(yīng)細(xì)胞(效靶比20:1),予以上述不同劑量x射線
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