禾谷鐮刀菌拮抗菌的分離鑒定及其拮抗基因的克隆.pdf

1、赤霉病主要是由禾谷鐮刀茵引起、導(dǎo)致小麥和大麥產(chǎn)量以及品質(zhì)損失的一種重要病害。目前，針對小麥赤霉病的生物防治的研究已逐漸成為熱點。本研究以抑制禾谷鐮刀菌的生長、控制小麥赤霉病為目的，分離篩選了禾谷鐮刀菌拮抗菌，并對其進行分類鑒定、克隆拮抗相關(guān)基因。
　　本論文首先從小麥樣品中分離篩選了419株對禾谷鐮刀茵具有抑制作用的的拮抗菌，構(gòu)建了禾谷鐮刀菌拮抗菌的菌種資源庫，并對其中的328株拮抗菌進行了菌種鑒定，結(jié)果表明，在這328株菌株中，

2、50％為芽孢桿菌屬，35％為泛菌屬，5％為假單胞菌屬，5％為寡養(yǎng)單胞菌屬，其余5％為非常見菌屬。
　　威團泛菌(Pantoea agglomerans) GH16是本實驗室分離到的另一株禾谷鐮刀菌拮抗菌，同樣能夠夠抑制禾谷鐮刀菌孢子萌發(fā)和鐮刀菌菌絲的生長。本研究采用轉(zhuǎn)座子插入突變的方法把EZ-Tn5＜R6Kγori/KAN-2＞Tnp中的轉(zhuǎn)座子通過電轉(zhuǎn)化的方法插入到禾谷鐮刀菌拮抗菌Pantoea agglomerans GH16中

3、，通過檢測轉(zhuǎn)座插入子對禾谷鐮刀菌的拮抗能力，從中篩選出34個失去禾谷鐮刀茵拮抗功能的轉(zhuǎn)座突變子。采用挽救克隆的方法對轉(zhuǎn)座突插入子中轉(zhuǎn)座子側(cè)翼序列進行了克隆和基因測序，把側(cè)翼序列在Genbank中進行核酸比對，并與GH16全基因組序列進行比對，在GH16第16號突變子中定位到一個閱讀框全長981bp的基因，該基因被推斷為LacⅠ家族的一個調(diào)控基因，對非核糖體肽合成酶(NRPS)基因的表達進行調(diào)控。
　　伯克霍爾德菌8B16是本實驗室

4、分離到的一株禾谷鐮刀菌拮抗菌，能夠抑制禾谷鐮刀菌孢子萌發(fā)和鐮刀菌菌絲的生長。本研究采用轉(zhuǎn)座子插入突變的方法把自殺性質(zhì)粒pSC123中的轉(zhuǎn)座子通過二親結(jié)合的方法插入到禾谷鐮刀菌桔抗菌8B16中，通過檢測轉(zhuǎn)座插入子對禾谷鐮刀菌的拮抗能力，從中篩選出65個失去禾谷鐮刀菌拮抗功能的轉(zhuǎn)座突變子。采用反向PCR的方法和熱不對稱PCR的方法對轉(zhuǎn)座插入子中轉(zhuǎn)座子側(cè)翼序列進行了克隆和基因測序，并對8B16的全基因組進行了測序，把側(cè)翼序列在Genbank中