禾谷鐮刀菌小RNA通路相關(guān)基因的功能研究.pdf

1、小麥赤霉病是世界范圍內(nèi)的一種真菌性病害，禾谷鐮刀菌是我國(guó)麥類赤霉病的主要致病種。小麥赤霉病的發(fā)生，不僅嚴(yán)重影響了小麥的產(chǎn)量和質(zhì)量，同時(shí)侵染的病粒會(huì)產(chǎn)生毒素對(duì)人畜健康造成巨大威脅。目前小RNA被證實(shí)在多種生物學(xué)過(guò)程中起到調(diào)控作用，其中多個(gè)關(guān)鍵基因在小RNA的加工和行使功能中發(fā)揮重要作用。如Dicer切割dsRNA或者莖環(huán)結(jié)構(gòu)的RNA前體成為小RNAs分子，Argonaute蛋白是RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RISC）的核心元件。目前有關(guān)這些基

2、因在動(dòng)植物以及部分真菌中的功能研究也有報(bào)道，但在禾谷鐮刀菌中這些基因的功能均不明確。RT-PCR結(jié)果表明禾谷鐮刀菌PH-1在產(chǎn)孢前后FGDCL2和FGAGL2兩個(gè)基因都有表達(dá)，我們構(gòu)建了FGDCL2和FGAGL2的同源重組敲除載體，通過(guò)分割標(biāo)記法用PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化禾谷鐮刀菌，經(jīng)PCR驗(yàn)證分別得到了2個(gè)DCL2基因敲除轉(zhuǎn)化子和2個(gè)AGO2基因的敲除轉(zhuǎn)化子。
　　 本文對(duì)FGDCL2和FGAGL2的敲除轉(zhuǎn)化子KOD21和KO

3、A21進(jìn)行了一系列生物學(xué)形狀的研究，發(fā)現(xiàn)敲除轉(zhuǎn)化子的菌落形態(tài)、菌絲形態(tài)、生長(zhǎng)速度、分生孢子產(chǎn)量和形態(tài)，產(chǎn)子囊殼的能力、子囊孢子的形態(tài)及在小麥胚芽鞘上的致病能力與原始菌株P(guān)H-1相比均沒(méi)有顯著差異。但KOD21在孢子萌發(fā)率、萌發(fā)后芽管的長(zhǎng)度及毒素相關(guān)基因的表達(dá)量與原始菌株差異顯著，KOA21在孢子萌發(fā)過(guò)程中菌絲的延長(zhǎng)與原始菌株均有顯著性差異。上述研究結(jié)果初步表明FGDCL2和FGAGL2基因?qū)坦如牭毒逆咦用劝l(fā)和產(chǎn)毒素方面有一定的影響。