雞骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分離、培養(yǎng)方法的建立及特性的研究.pdf

1、骨骼肌是研究發(fā)育的很多基本原理的一個(gè)理想模型。研究肌肉發(fā)生對(duì)于理解胚胎發(fā)育的全過程具有重要意義。
　　衛(wèi)星細(xì)胞是一類存在于成體骨骼肌肌纖維基膜和原漿膜間的梭形或紡錘型細(xì)胞。衛(wèi)星細(xì)胞在骨骼肌生長中起關(guān)鍵作用，它調(diào)節(jié)著出生后的肌肉的生長，是成體肌肉增長的首要途徑。
　　以往的研究結(jié)果指出：骨骼肌的修復(fù)過程是一個(gè)通過活化刺激因子和抑制因子而保持相對(duì)平衡的過程，由此而保證骨骼肌在修復(fù)過程中在肌肉大小和位置的完善。成纖維細(xì)胞生長因子（

2、FGFs）是肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖和成肌分化的重要調(diào)節(jié)因子，促進(jìn)衛(wèi)星細(xì)胞增殖并可逆轉(zhuǎn)衛(wèi)星細(xì)胞向肌纖維的成肌終末分化。Myostatin屬于TGF-β超家族，在缺少myostatin小鼠和myostatin突變的牛中表現(xiàn)的肌肉肥大和增生，很大程度上被認(rèn)為是myostatin在衛(wèi)星細(xì)胞增殖或分化時(shí)的抑制作用被去除所致。Myostatin很可能在骨骼肌修復(fù)過程中對(duì)各生長因子的平衡起重要的作用。
　　蛋雞(Layer)和肉雞(Broiler)是經(jīng)

3、過長期遺傳選育形成的兩個(gè)品系，在骨骼肌生長發(fā)育性狀上有很大的差異，肉用仔雞骨骼肌生長的速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過產(chǎn)蛋雞，所以蛋雞和肉雞是研究骨骼肌生長發(fā)育機(jī)制的理想模型。蛋雞和肉雞骨骼肌發(fā)育性狀的差異在出生后表現(xiàn)得最顯著，這與兩者骨骼肌組織中存在的衛(wèi)星細(xì)胞的特性具有很大的聯(lián)系，本課題采用免疫熒光方法、RT-PCR方法、同位素標(biāo)記、細(xì)胞培養(yǎng)等方法進(jìn)行研究取得如下結(jié)果：
　　1．建立和完善了分離、培養(yǎng)肌衛(wèi)星細(xì)胞的技術(shù)方法；得到發(fā)育不同時(shí)期表達(dá)標(biāo)記基

4、因pax7和desmin的衛(wèi)星細(xì)胞。
　　2．利用RT-PCR方法檢測分離培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后的蛋雞和肉雞胸肌衛(wèi)星細(xì)胞中有關(guān)骨骼肌發(fā)育調(diào)控因子的表達(dá)并進(jìn)行比較。在mRNA表達(dá)水平?jīng)]有看到明顯差異。
　　3．利用Ci3H-TdR標(biāo)記增殖的衛(wèi)星細(xì)胞，比較一定發(fā)育時(shí)期，蛋肉雞衛(wèi)星細(xì)胞增殖速度的差異。結(jié)果表明，在相同的培養(yǎng)條件下，出雛4天的肉雞衛(wèi)星細(xì)胞具有明顯高于蛋雞衛(wèi)星細(xì)胞的生長速度。
　　4．蛋肉雞衛(wèi)星細(xì)胞在細(xì)胞因子

5、bFGF(basicfibroblastgrowhfactor)和Myostatin處理后的形態(tài)學(xué)觀察及相關(guān)基因的表達(dá)分析結(jié)果顯示，bFGF通過上調(diào)MyoD、下調(diào)Myogenin，明顯加快和延長衛(wèi)星細(xì)胞的增殖、推遲分化進(jìn)程。而Myostatin可能通過上調(diào)p21使細(xì)胞保持非增殖狀態(tài)。
　　對(duì)于禽類骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的特性在國外已有較深入的研究，但利用蛋肉雞長期自然選育而形成的差異——在骨骼肌發(fā)育上的性狀差異，來進(jìn)行骨骼肌發(fā)育機(jī)理尤其是