南方地區(qū)家族性Hungtington舞蹈病與IT15基因突變相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：本實驗對我國南方地區(qū)家族性HD基因(IT15基因)研究的主要目的：(1)明確該地區(qū)家族性Hungtington舞蹈病IT15基因突變的特點；(2)明確臨床上疑為HD患者的診斷；(3)比較HD患者和正常人CAG重復(fù)數(shù)目范圍的差異；(4)探討CAG重復(fù)次數(shù)與發(fā)病年齡、疾病嚴重程度及性別的關(guān)系。 方法：HD患者來自于我國南方地區(qū)4個HD家系的77例成員，其中HD患者13例，家系正常者64例。20例正常對照者來自該地區(qū)健康人群。H

2、D的臨床診斷主要依據(jù)病史、家族史和臨床表現(xiàn)?；蚪MDNA均從外周血白細胞中提取，PCR方法擴增IT15基因CAG重復(fù)序列。采用2％瓊脂糖凝膠電泳和8％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳判斷PCR擴增產(chǎn)物的大小。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化回收后克隆并測序，以明確目的基因的序列和重復(fù)次數(shù)。擴增產(chǎn)物經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳后，根據(jù)已測序的DNA分子量及遷移率擬合方程lgY=a+blgX(X-遷移距離，Y-DNA片段大小)計算其它擴增產(chǎn)物的分子量大小，然后根據(jù)公式N

3、(CAG)=(DNA長度-側(cè)翼序列長度)/3計算CAG重復(fù)次數(shù)N。 結(jié)論:1.本研究對南方地區(qū)4個家系的13例HD患者和64例親屬及20例正常健康對照者作IT15基因動態(tài)突變檢測，所有患者均檢測出攜帶異常等位基因，表明我國南方地區(qū)家族性Huntington舞蹈病的發(fā)病為IT15基因的動態(tài)突變所致。2.通過對南方兩地區(qū)HD患者基因突變檢測和臨床資料分析，初步明確了該地區(qū)HD患者異常等位基因CAG三核苷酸重復(fù)數(shù)目與發(fā)病年齡存在負相關(guān)