攜載柔紅霉素磁性納米四氧化三鐵逆轉(zhuǎn)K562-n-VCR細(xì)胞多藥耐藥的體內(nèi)研究.pdf

1、目的:本課題旨在研究攜載柔紅霉素（DNR）的磁性納米四氧化三鐵顆粒（MNP-Fe3O4）在裸鼠體內(nèi)逆轉(zhuǎn)人慢性粒細(xì)胞白血病急性紅白血病變裸鼠高成瘤性多藥耐藥細(xì)胞株K562-n/VCR的效果，并測(cè)定Mdr-1、Bcl-2、Bax和Caspase-3的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)水平，以初步探討載藥納米顆粒體內(nèi)逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥的作用機(jī)理，為載藥納米顆粒逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法:（1）采用機(jī)械吸附法在4℃將0．2g/L DNR溶

2、液與0．116g/L MNP-Fe3O4溶液以1：1比例聚合48h。（2）培養(yǎng)的人慢性粒細(xì)胞白血病急性紅白血病變裸鼠高成瘤性細(xì)胞株K562-n及其相應(yīng)的多藥耐藥株K562-n/VCR，分別接種于裸鼠兩側(cè)的腹股溝皮下，建立人白血病移植瘤模型。（3）十天以后，將雙側(cè)成瘤裸鼠隨機(jī)分為5組，A組給予生理鹽水，B組給予MNP-Fe3O4，C組給予DNR，D組給予攜載DNR的MNP-Fe3O4，E組給予攜載DNR的MNP-Fe3O4，同時(shí)在腫瘤表面

3、固定磁場(chǎng)。在實(shí)驗(yàn)開始后的第1、5、9、13、17和21天分別測(cè)量腫瘤體積。治療結(jié)束后，分離瘤組織秤重，并用蘇木素-伊紅（HE）染色對(duì)腫瘤組織和正常器官進(jìn)行病理切片觀察。用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time RT-PCR）以及免疫蛋白印記法（WB）檢測(cè)K562-n/VCR腫瘤組織Mdr-1、Bcl-2、Bax和Caspase-3的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。 結(jié)果:（1）K562-n/VCR腫瘤：①治療20天后，A、B、C、D和E五

4、組的腫瘤體積分別為4．8700±2．0694cm3、4．6432±1．5229cm3、4．1657±0．8257cm3、2．2406±0．3401cm3和2．0754±1．6277cm3。②A、B、C、D和E五組的腫瘤重量分別為3．5297±1．4999g、3．4253±1．1218g、3．0012±0．5421g、1．6812±0．1522g和1．5979±0．4673g。③病理結(jié)果顯示：A和B組腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)良好，未見明顯細(xì)胞壞死；C

5、組腫瘤細(xì)胞可見散在細(xì)胞壞死，部分細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、核碎裂等，D和E組腫瘤組織內(nèi)可見細(xì)胞明顯破碎、壞死、組織的纖維化。④D和E組的Mdr-1的轉(zhuǎn)錄水平低于A、B和C三組，但是P-gp蛋白表達(dá)在五組中無差異。⑤D和E組腫瘤的Bcl-2的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)量低于A、B和C三組，D和E組腫瘤的Bax和Caspase-3的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)量高于A、B和C三組。（2）K562-n腫瘤：①治療20天后，A、B、C、D和E五組的腫瘤體積分別為2．949

6、5±0．7106cm3、2．3779±0．4802cm3、0．9226±0．5458cm3、0．8473±0．4800cm3和0．7942±0．4665cm3。②A、B、C、D和E五組的腫瘤重量分別為2．0789±0．4472g、1．8912±0．3984g、0．8437±0．4913g、0．8164±0．4291g和0．8195±0．4702g。③病理結(jié)果顯示：A和B組腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)良好，未見明顯細(xì)胞壞死；C、D和E組腫瘤組織內(nèi)可見細(xì)胞

7、明顯破碎、壞死、組織的纖維化。 結(jié)論:（1）攜載DNR的MNP-Fe3O4可以在體內(nèi)有效的逆轉(zhuǎn)K562-n/VCR腫瘤的多藥耐藥。（2）攜載DNR的MNP-Fe3O4可以在體內(nèi)下調(diào)K562-n/VCR腫瘤的Mdr-1的轉(zhuǎn)錄，但是并不下調(diào)P-gp的表達(dá)。（3）凋亡相關(guān)檢測(cè)提示攜載DNR的MNP-Fe3O4在體內(nèi)通過下調(diào)Bcl-2的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，上調(diào)Bax的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，激活Caspase-3途徑誘導(dǎo)K562-n/VCR腫瘤的凋亡而增加