腸道菌群紊亂模型小鼠皮膚濕疹樣改變的相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過檢測(cè)小鼠皮膚屏障功能、血清IFN-γ及IL-4的水平以及血液中CD4、CD8水平，探討腸道菌群紊亂引起小鼠皮膚濕疹的相關(guān)機(jī)制及益生菌的作用。
　　方法:1、分組方法:選擇SPF級(jí)昆明小鼠90只，雌雄各半，將小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后隨機(jī)分成3組，即正常對(duì)照組（A組）、模型組（B組）、金雙歧治療組（C組），每組30只。2、采用德國(guó)Courage Khazaka electronic公司生產(chǎn)的多功能皮膚測(cè)試儀MPA9分別檢測(cè)小鼠背

2、部皮膚經(jīng)皮水分丟失量(TEWL)、角質(zhì)層含水量;測(cè)試環(huán)境溫度為19.8℃～21.4℃，相對(duì)濕度為45.8％～49％。;角質(zhì)層含水量及皮脂含量的單位為au(arbitrar yunit)，經(jīng)皮水分丟失量的單位為g/m2h;3、用糞便標(biāo)本直接涂片觀察的方法檢測(cè)腸道菌群:取新鮮糞便0.1g，加生理鹽水0.9ml用無菌玻珠打碎制成勻漿液，取糞便混懸液制成涂片，用科氏革蘭染色的改良方法進(jìn)行染色，染色成功后，使用油鏡直接觀察糞便標(biāo)本情況;4、采用S

3、emiBio細(xì)胞玻片計(jì)數(shù)法檢測(cè)小鼠血液中CD4、CD8水平;5、采用ELISA法檢測(cè)小鼠血清中IFN-γ、IL-4細(xì)胞因子水平;6、所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所得計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，采用t檢驗(yàn)、方差分析等方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:模型組與對(duì)照組相比，腸道菌群總數(shù)明顯減少，但3組小鼠腸道中各菌群數(shù)占總菌群數(shù)的比率有所變化，結(jié)果顯示:B組與A、C組

4、相比G+b及G-b占腸道總菌群數(shù)比率明顯下降，G+c及G-c占總菌群數(shù)的比率明顯升高，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與A組相比，C組G+b占總菌群數(shù)的比率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而其余各菌群數(shù)占總菌群數(shù)比率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　小鼠皮膚TEWL及角質(zhì)層含水量檢測(cè)結(jié)果:與A組相比，B、C組小鼠TEWL值低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與B組TEWL值相比，C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);B組角質(zhì)

5、層含水量與A、C組相比較高，差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);A組與C組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　小鼠血液中CD4、CD8的表達(dá)程度結(jié)果顯示:B組與A、C組相比CD4、CD8表達(dá)程度受抑制，均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);與A組相比，C組CD4、CD8表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　小鼠血清中IFN-γ、IL-4細(xì)胞因子水平結(jié)果顯示:與A組相比，B組IL-4水平升高，IFN-

6、γ水平降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與B組相比，C組IFN-γ水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而IL-4水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);A組與C組相比，兩者差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　HE染色光鏡觀察結(jié)果顯示用抗生素灌胃2周后，B、C組部分小鼠背部、肛周出現(xiàn)濕疹樣改變，光鏡下可見表皮細(xì)胞角化不全、表皮局部壞死、滲出并伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，浸潤(rùn)的細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞及少量中性粒細(xì)胞，符合急性濕疹

7、的病理改變。C組小鼠用金雙歧灌胃10d后，皮疹有所好轉(zhuǎn)，光鏡下可見亞急性濕疹及其恢復(fù)期改變，并向慢性濕疹轉(zhuǎn)化，表現(xiàn)為角化過度、角化不全，顆粒層增厚，表皮輕度肥厚，真皮淺層水腫伴成纖維細(xì)胞增生，基底細(xì)胞液化已不明顯。
　　結(jié)論:
　　(1)抗生素引起小鼠腸道菌群紊亂可以使小鼠皮膚出現(xiàn)濕疹樣皮疹。
　　(2)腸道菌群紊亂可以引起小鼠血清中IFN-γ、IL-4細(xì)胞因子的失衡及CD4、CD8細(xì)胞數(shù)量減少，這可能與小鼠皮膚濕疹有