高尿酸血癥相關(guān)腸道菌群研究.pdf

1、高尿酸血癥(Hyperuricemia，HUA)是一種由嘌呤代謝紊亂、尿酸產(chǎn)生過(guò)多或排泄減少引起的血尿酸水平升高的代謝性疾病。流行病學(xué)研究顯示，過(guò)去的多年內(nèi)高尿酸血癥的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，給患者的生活和工作帶來(lái)了極大的不便，作為一種代謝性疾病，腸道菌群在該疾病的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。
　　本研究首先構(gòu)建了高尿酸血癥大鼠模型和高尿酸血癥小鼠模型，然后分離腸道菌群，利用無(wú)菌ICR小鼠，通過(guò)灌胃進(jìn)行菌群定植實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)選取了40只

2、雄性無(wú)菌ICR小鼠為研究對(duì)象，分為3個(gè)組:大鼠腸道組（R組）12只、小鼠腸道組（M組）12只、對(duì)照組（C組）16只，然后，內(nèi)眥靜脈取血，分離血清檢測(cè)血尿酸水平(SUA)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)等生化指標(biāo)，同時(shí)檢測(cè)體重、尿量、飲水量、進(jìn)食量等指標(biāo)變化;然后提取菌群定植模型小鼠（R組和M組）糞便中菌群基因組DNA，采用barcode454測(cè)序技術(shù)對(duì)16

3、S rRNA基因V1-V3區(qū)進(jìn)行測(cè)序，數(shù)據(jù)優(yōu)化后進(jìn)行OTU聚類(lèi)分析和分類(lèi)學(xué)分析。
　　菌群定植5周時(shí)間內(nèi)，3組之間體重、24h進(jìn)食量、24h尿量和24h飲水量差異不顯著。血生化檢測(cè)顯示，菌群定植5周后，R組TG顯著高于C組，其余的生化指標(biāo)在3組之間無(wú)顯著差異。糖耐量檢測(cè)顯示，菌群定植5周后，葡萄糖負(fù)荷30 min時(shí)，R組血糖值顯著高于C組(p＜0.05)，在負(fù)荷60、90、120 min時(shí)，R組和M組的血糖值均顯著高于C組(p＜0

4、.05)，說(shuō)明菌群的定植后引起了血糖代謝異常。
　　菌群16S rRNA基因V1-V3區(qū)測(cè)序結(jié)果顯示，共獲得205,338條優(yōu)化序列，長(zhǎng)達(dá)91，817，752 bp，構(gòu)建文庫(kù)的覆蓋率達(dá)99％，隨著測(cè)序深度的增加稀疏性曲線趨向平坦，說(shuō)明庫(kù)容量足夠大，可以代表實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腸道菌群中的絕大多數(shù)細(xì)菌類(lèi)群，且樣本量充分，可以進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。菌群組成分析顯示，在屬的分類(lèi)水平上，M組和R組菌群分布差異不大，且隨著定植時(shí)間的增加菌群結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定，有助于

5、研究和挖掘高尿酸血癥相關(guān)的微生物群體。主成分分析顯示，定植不同的腸道菌群可能是導(dǎo)致M組和R組分開(kāi)的重要因素（可能性為35.68％）;每個(gè)組個(gè)體之間的差別可能會(huì)影響樣本的組成（可能性占13.29％）。另外，相似度分析顯示，M組與R組之間樣本的相似性低于組內(nèi)樣本的相似性，且兩組樣本之間的相似度隨著菌群定植的時(shí)間的增加不斷趨于穩(wěn)定。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，糞便菌群定植引起小鼠血脂、血糖等代謝相關(guān)指標(biāo)的變化與臨床上高尿酸血癥患者常伴發(fā)血脂、血