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1、目的: 構(gòu)建三個(gè)Smurf1 shRNA真核表達(dá)重組質(zhì)粒；探討其對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子beta1（TGF-beta1）誘導(dǎo)的人腎小管近端上皮細(xì)胞（HK-2）轉(zhuǎn)分化（EMT）過程中E-Cadherin及alpha-SMA表達(dá)的影響，并篩選出一個(gè)最有效干擾質(zhì)粒。
方法: 將針對(duì)人Smurf1設(shè)計(jì)的采用體外轉(zhuǎn)錄生物合成的特異性短發(fā)夾RNA（shRNA）雙鏈分子用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法導(dǎo)入體外培養(yǎng)有和無TGF-beta1（10ug/L）刺激的H
2、K-2。經(jīng)過G418壓力性篩選后，免疫蛋白印跡檢測(cè)E-Cadherin及alpha-SMA在蛋白水平上的表達(dá)變化。將重組質(zhì)粒命名為pSilencer-S1、pSilencer-S2、pSilencer-S3。
結(jié)果: pSilencer-S1、pSilencer-S2、pSilencer-S3 三個(gè)重組子均構(gòu)建成功；TGF-beta1刺激后，HK-2細(xì)胞中E-Cadherin表達(dá)下調(diào)及alpha-SMA表達(dá)上調(diào)；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
3、質(zhì)粒pSilencer-S1、pSilencer-S2、pSilencer-S3可抑制alpha-SMA表達(dá)，恢復(fù)E-Cadherin表達(dá)，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中，以pSilencer S1抑制效果最明顯（P<0.05）。
結(jié)論: 在TGF-beta1誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化進(jìn)程中alpha-SMA表達(dá)上調(diào)及E-Cadherin表達(dá)下調(diào)；基因轉(zhuǎn)染恢復(fù)E-Cadherin表達(dá)及抑制alpha-SM
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