人Smurf1 shRNA真核表達載體的構(gòu)建與鑒定及其抑制HK-2轉(zhuǎn)分化的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 構(gòu)建三個Smurf1 shRNA真核表達重組質(zhì)粒；探討其對轉(zhuǎn)化生長因子beta1（TGF-beta1）誘導(dǎo)的人腎小管近端上皮細胞（HK-2）轉(zhuǎn)分化（EMT）過程中E-Cadherin及alpha-SMA表達的影響，并篩選出一個最有效干擾質(zhì)粒。
　　 方法: 將針對人Smurf1設(shè)計的采用體外轉(zhuǎn)錄生物合成的特異性短發(fā)夾RNA（shRNA）雙鏈分子用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法導(dǎo)入體外培養(yǎng)有和無TGF-beta1（10ug/L）刺激的H

2、K-2。經(jīng)過G418壓力性篩選后，免疫蛋白印跡檢測E-Cadherin及alpha-SMA在蛋白水平上的表達變化。將重組質(zhì)粒命名為pSilencer-S1、pSilencer-S2、pSilencer-S3。
　　 結(jié)果: pSilencer-S1、pSilencer-S2、pSilencer-S3 三個重組子均構(gòu)建成功；TGF-beta1刺激后，HK-2細胞中E-Cadherin表達下調(diào)及alpha-SMA表達上調(diào)；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染

3、質(zhì)粒pSilencer-S1、pSilencer-S2、pSilencer-S3可抑制alpha-SMA表達，恢復(fù)E-Cadherin表達，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中，以pSilencer S1抑制效果最明顯（P<0.05）。
　　 結(jié)論: 在TGF-beta1誘導(dǎo)HK-2細胞轉(zhuǎn)分化進程中alpha-SMA表達上調(diào)及E-Cadherin表達下調(diào)；基因轉(zhuǎn)染恢復(fù)E-Cadherin表達及抑制alpha-SM

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