葡萄球菌腸毒素B(SEB)中和抗體的協(xié)同作用及其分子機制.pdf

1、研究背景：葡萄球菌腸毒素B（SEB）是一種超抗原，通過結(jié)合T細胞上特定的TCRVβ區(qū)和MHC-Ⅱ類分子，活化T細胞使其釋放一系列的細胞因子，主要包括IFN-γ和TNF-α等，引起機體發(fā)生毒性休克綜合征（TSS）甚至死亡。SEB是一種潛在的生物武器，致死劑量在ng/kg體重左右。目前對毒素類物質(zhì)中毒的治療主要用中和抗體，如肉毒毒素抗血清在臨床上用來治療肉毒毒素中毒，靜脈注射人丙種球蛋白（IVIG）用來治療SEB中毒。在針對肉毒毒素和破傷風

2、毒素的導克隆抗體（mAb）中和作用的研究中，均提示識級不同表位的mAbs組合有很強的協(xié)同作用。所以混合導克隆抗體可能是替代抗血清、提高療效并實現(xiàn)人源化的一種新途徑。組合抗體發(fā)揮協(xié)同作用的機制與其組合后親和力的提高和抗體對毒素覆蓋面積的增大有關(guān)，但確切的機制目前還不完全清楚。
　　目的：制備針對SEB的mAbs并篩選具有協(xié)同作用的組合抗體，通過體內(nèi)外實驗評價其中和作用，精確鑒定mAbs識級的表位和測定mAbs的親和力，研究不同表位在

3、毒素分子表面的分布規(guī)律以及對毒素構(gòu)象和功能產(chǎn)生的影響。
　　方法和結(jié)果：用常規(guī)方法制備了22株特異性強、效價高的抗SEBmAbs，以任意3株mAbs為一組等量混合，觀察其對SEB刺激T細胞產(chǎn)生的增殖效應(yīng)的抑制作用，篩選出中和活性最強的一組mAbs，由mAbsFMU-SEB-1，2和10組成，并通過體內(nèi)實驗對其中和作用進行了證實。通過對SEB分子上參與TCR和MHC-Ⅱ類分子結(jié)合的氨基酸進行定點突變，并且表達由SEB/SEC1構(gòu)成的

4、一系列雜合分子，鑒定3株抗體識級的表位：FMU-SEB-1識級的表位由138和143位的氨基酸組成，該區(qū)域與SEB-TCR、SEB-MHC-Ⅱ類分子相互作用的部位距離較遠，提示可能與改變SEB的構(gòu)象有關(guān)系；FMU-SEB-2識級的表位由55、56、61、81和88位氨基酸組成，覆蓋SEB-TCR相互結(jié)合的區(qū)域；FMU-SEB-10識級的表位由91和177位氨基酸組成，這2個aa位于SEB-TCR結(jié)合位點的邊緣，其中91位aa靠近SEB-