肢體缺血預(yù)處理對(duì)心肌MAPK相關(guān)基因表達(dá)譜變化的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用全基因表達(dá)譜芯片技術(shù)分析肢體缺血預(yù)處理過(guò)程中心肌基因差異性表達(dá)，了解肢體缺血預(yù)處理對(duì)心肌MAPK相關(guān)基因表達(dá)譜變化的影響。
　　方法：采用隨機(jī)數(shù)字法，隨機(jī)分為兩組每組5只，肢體缺血預(yù)處理（limb ischemia preconditioning,LIP）組（LIP組）和空白組（C組）。LIP組用橡皮筋套住大鼠右后肢根部，缺血5 min，再灌注5 min，共3個(gè)循環(huán)。C組大鼠麻醉后僅進(jìn)行假處理。觀察24h肢體缺血預(yù)處理后

2、24小時(shí)即LIP延遲相，分別取LIP組和C組的左心室的心尖部厚度在0.5㎝以下，重50-100㎎的組織，放于RNA保存液-80℃保存。提取總RNA進(jìn)行擴(kuò)增、3H-吲哚菁類染料（cyanine-3,Cy3）標(biāo)記，與Agilent4x44K大鼠全基因組表達(dá)芯片雜交，熒光掃描，經(jīng)基因本體（Gene Ontology，GO）分析、Pathway分析數(shù)據(jù)處理，篩選出MAPK信號(hào)通路的差異表達(dá)基因,用實(shí)時(shí)定量PCR分析驗(yàn)證部分與MAPK信號(hào)通路相關(guān)

3、的差異表達(dá)基因，并結(jié)合通路分析來(lái)探索MAPK信號(hào)通路與肢體缺血預(yù)處理的內(nèi)在聯(lián)系。
　　結(jié)果：芯片篩選結(jié)果顯示差異基因?yàn)楸稊?shù)變化大于2倍（fold change cut-off≥2.0）有1364個(gè)。GO分析結(jié)果顯示，生物學(xué)過(guò)程（Biological Process,BP）中外界刺激在其差異表達(dá)基因中所占比例最大；分子功能(Molecular Function,MF)相關(guān)的差異基因中最多的是結(jié)合受體基因；細(xì)胞組分（Cellular

4、Component，CC）中細(xì)胞通道相關(guān)基因變化比較顯著。Pathway分析結(jié)果中顯示上調(diào)通路有10條；下調(diào)通路有10條，其在MAPK信號(hào)通路中，上調(diào)的基因有19個(gè)，下調(diào)的基因有15個(gè)。MAPK通路中Map3k6、Il1r2、Grb2、AKT和HSP變化倍數(shù)超過(guò)2倍，其Map3k6變化最顯著。RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片檢測(cè)的變化趨勢(shì)一致。
　　結(jié)論：以京都大學(xué)基因組和基因百科全書數(shù)據(jù)庫(kù)（Kyoto Encyclopedia of

5、Genes and Genomes，KEGG）為依據(jù)，對(duì)大鼠LIP延遲相心肌基因表達(dá)通路分析， LIP組與C組心肌基因表達(dá)存在多個(gè)上調(diào)和下調(diào)基因的差異；P38M APK信號(hào)通路中基因AKT、HSP在LIP延遲相對(duì)心肌作用起正向調(diào)控作用；ERK1/2信號(hào)通路中基因Grb2在LIP延遲相對(duì)心肌作用起正向調(diào)控作用；經(jīng)典的MAPK信號(hào)通路中基因Il1r2在LIP延遲相對(duì)心肌作用起負(fù)向調(diào)控作用。即LIP延遲相對(duì)心肌作用過(guò)程中MAPK信號(hào)通路對(duì)起雙