生物鐘基因hClock在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)研究.pdf

1、目的
　　 生物鐘基因是設(shè)定并調(diào)控機(jī)體出現(xiàn)晝夜節(jié)律周期的系統(tǒng)，是一種以近似24小時(shí)為周期的振蕩器。Clock基因處于生物鐘基因家族的核心地位。結(jié)直腸癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，它的發(fā)生是多因素、多步驟的復(fù)雜生物學(xué)過程。許多研究表明，結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與生物鐘基因表達(dá)的異常存在關(guān)系，但其分子機(jī)制還知之甚少。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用分子生物學(xué)方法，研究hClock基因在人結(jié)直腸癌及正常腸道粘膜組織中的表達(dá)，hClock基因表

2、達(dá)與腫瘤相關(guān)基因以及與腫瘤轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)、臨床分期的關(guān)系。通過研究，為結(jié)直腸腫瘤的發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)，并為腫瘤治療提供新的靶點(diǎn)。
　　 樣本
　　 本實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)本共30例，取自復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院病理研究中心腫瘤組織庫(kù)。標(biāo)本采集于復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院普通外科自2007年1月至2008年9月行結(jié)直腸癌根治術(shù)患者的手術(shù)切除大體標(biāo)本。標(biāo)本采集于10:00～14:00時(shí)間段。在手術(shù)切除標(biāo)本自體內(nèi)切斷所有血供后15分鐘內(nèi)，

3、自腫瘤侵犯處腸壁粘膜面取材作為實(shí)驗(yàn)組，自遠(yuǎn)離腫瘤近標(biāo)本切緣處腸壁粘膜面取材作為對(duì)照組，所取標(biāo)本立即投入液氮中妥善保存。并且完整收集所有患者的臨床病史資料進(jìn)行分析。所有病例術(shù)前均未發(fā)現(xiàn)腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，未行放療、化療。所有病例經(jīng)石蠟病理證實(shí)為結(jié)直腸腺癌，切緣均未見腫瘤累及。
　　 方法
　　 1.蛋白免疫熒光染色組織化學(xué)方法檢測(cè)hCLOCK蛋白在癌組織與配對(duì)正常組織中表達(dá)的差異；
　　 2.熒光定量實(shí)時(shí)PCR方法檢測(cè)h

4、Clock基因及腫瘤相關(guān)基因(Bak、Bax、Bid、HIF-1α、ARNT、TNFRⅠ、TNFRⅡ及VEGF)在癌組織與配對(duì)正常組織中表達(dá)的差異。
　　 結(jié)果
　　 1.所有標(biāo)本中均有hCLOCK蛋白的表達(dá)；hCLOCK蛋白在人結(jié)直腸癌中表達(dá)水平較正常組織明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；hCLOCK蛋白在腫瘤分化差、TNM分期晚期的腫瘤中表達(dá)升高水平更為明顯；64.3％有腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中hCLOCK

5、蛋白高表達(dá)；
　　 2.所有標(biāo)本中均有hClock基因的表達(dá)；hClock基因在人結(jié)直腸癌中表達(dá)水平較正常組織明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；hClock基因在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)與hCLOCK蛋白的表達(dá)呈顯著線性正相關(guān)(P<0.01)；
　　 3.在人結(jié)直腸癌中，ARNT、HIF-1α、TNFRⅠ及VEGF基因表達(dá)水平明顯增高，TNFRⅡ表達(dá)水平明顯降低，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Bak

6、基因表達(dá)水平增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Bax、Bid表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；ARNT、HIF-1α及VEGF在腫瘤分化差、TNM分期晚期的腫瘤中表達(dá)升高水平更為明顯；所有14例有腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中均有VEGF高表達(dá)；
　　 4.在人結(jié)直腸癌中，hClock基因表達(dá)水平與ARNT、HIF-1α及vEGF基因表達(dá)水平呈線性正相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Bak、Bax、Bid、TN