慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰濕證模型的初步建立與評價.pdf

1、慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種以氣流受限不完全可逆為特征的疾病,其發(fā)病率高、致殘率高、致死率高、社會經濟負擔沉重,嚴重威脅人類健康。本課題初步探索符合中醫(yī)學基礎理論的慢性阻塞性肺病急性加重期(acute exacerbationof chronic obstructive pulmonary diseases,AECOPD)大鼠痰濕證動物模型的制備方法和條件,

2、通過大鼠肺功能、細胞因子和炎癥介質等變化來初步探討中藥對其作用機制,從而為臨床應用提供依據。
　　目的:成功建立AECOPD痰濕證大鼠模型;通過方證對應和非對應干預,來初步探討中藥對AECOPD痰濕證大鼠模型的作用機制。
　　方法:大鼠按隨機數字表法進行分組:wistar大鼠98只,將動物隨機分為7組:對照組、痰濕證組、COPD穩(wěn)定期組(穩(wěn)定組)、AECOPD組(急性組)、AECOPD痰濕證組(模型組)、AECOPD痰濕證方

3、證對應組(對應組)、AECOPD痰濕證方證非對應組(非對應組)。①COPD穩(wěn)定期大鼠模型建立:穩(wěn)定組、急性組、模型組、對應和非對應組,以上各組經鼻注入濃度為6x108CFU/ml的肺炎克雷伯桿菌菌液,同時進行被動香煙吸入,共12w,建立COPD穩(wěn)定期大鼠模型;②AECOPD大鼠模型建立:于13w的第4天,急性組、模型組、對應和非對應組,經鼻滴入濃度為18x1016CFU/ml的肺炎克雷伯桿菌菌液,于開始滴菌后4天造成AECOPD大鼠模型

4、;對照組和痰濕證大鼠不進行以上滴菌和煙熏處理。③痰濕證與病證結合模型的建立:痰濕證組、模型組、對應和非對應治療組均分別從第12w開始寒冷環(huán)境中進行刺激持續(xù)造成痰濕證證候;其余各組在室溫(26±1℃)下飼養(yǎng)。④中醫(yī)經典方劑反證:對應和非對應組從第14w開始分別采用二陳湯和三子養(yǎng)親湯(含0.61g生藥/ml)、葶貝膠囊(0.476g·Kg-1·d-1)灌胃;其余各組給予室溫下的蒸餾水(26±1℃)灌胃。
　　結果:1.大鼠體溫的變化<

5、br>　　大鼠體溫結果顯示,與對照組比較,模型組、痰濕證組、非對應組各組大鼠體溫均顯著降低(P<0.05);急性組、對應組與穩(wěn)定組比較無顯著性差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比,模型組、痰濕證組、非對應組各組大鼠體溫均顯著降低(P<0.05),急性組、對應組比較無顯著性差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　2.各組大鼠外周血WBC計數及GRA％的變化
　　

6、各組大鼠外周血WBC計數及GRA%的結果顯示,與對照組比較,模型組、急性組、非對應組、痰濕證組WBC計數、GRA%顯著增高(P<0.01),穩(wěn)定組、對應組WBC計數和GRA%無明顯差別(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,急性組、痰濕證組、模型組、非對應組顯著升高(P<0.01),對應組無明顯差別(P>0.05);與急性組比較,模型組、非對應組升高(P<0.05),對應組降低(P<0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模

7、型組無顯著差異(P>0.05)。
　　3.各組大鼠BALF及血清細胞因子的變化
　　3.1.支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中TNF-a、IL-8變化
　　BALF中TNF-a、IL-8結果顯示,與對照組比較,模型組、急性組、非對應組、痰濕證組BALF中TNF-a、IL-8計數顯著增高(P<0.01),穩(wěn)定組、對應組BALF中TNF-a、IL-8計數無明顯差別(P>0.

8、05);與穩(wěn)定組比較,模型組、急性組、痰濕證組、非對應組顯著升高(P<0.05),對應組無明顯差別(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　3.2.BALF中ICAM-1變化
　　BALF中ICAM-1結果顯示,與對照組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對應組、對應組各組大鼠BALF中ICAM-1明顯升高(P<0.05),穩(wěn)定組、對應組大鼠血漿中ICAM-1無顯

9、著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對應組大鼠BALF中ICAM-1明顯升高(P<0.05),對應組大鼠BALF中ICAM-1無顯著差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　3.3.血清中TNF-a、IL-8、CRP變化
　　血清中TNF-a、IL-8、CRP結果顯示,與對照組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對應組各組大鼠血清

10、中TNF-a、IL-8、CRP明顯增高(P<0.05,P<0.01),穩(wěn)定組、對應組無顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,急性組、模型組、痰濕證組、非對應組各組大鼠血清中TNF-a、IL-8、CRP明顯增高(P<0.05,P<0.01),對應組無顯著差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　4.甲狀腺軸和腎上腺素中相關指標變化
　　4.1.血清FT3、F

11、T4變化
　　血清中FT3、FT4結果顯示,與對照組比較,痰濕證組、模型組、非對應組各組大鼠血清FT3、FT4明顯降低(P<0.05,P<0.01),急性組、穩(wěn)定組、對應組無顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、模型組、非對應組大鼠血清FT3、FT4明顯降低(P<0.05,P<0.01),對應組大鼠無顯著差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　

12、4.2.血清Cor變化
　　血清Cor結果顯示,與對照組比較,痰濕證組、模型組、非對應組各組大鼠血清Cor明顯升高(P<0.05),加重組、穩(wěn)定組、對應組無顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、模型組、非對應組大鼠血清Cor明顯升高(P<0.05),對應組大鼠血清Cor無顯著差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　4.3.血清腎上腺素(E)變化

13、
　　血清E結果顯示,與對照組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對應組各組大鼠血清E明顯降低(P<0.05,P<0.01),穩(wěn)定組、對應組無顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、模型組、非對應組大鼠血清E明顯降低(P<0.05,P<0.01),對應組大鼠無顯著差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　4.4.血清去甲腎上腺素(NE)變化
　

14、　血清NE結果顯示,與對照組比較,痰濕證組、加重組、模型組、非對應組各組大鼠血清NE明顯升高(P<0.05),穩(wěn)定組、對應組無顯著差異(P>0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組、模型組、非對應組大鼠血清NE明顯升高(P<0.05),對應組大鼠無顯著差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　5.大鼠肺功能指標變化
　　5.1.大鼠呼吸頻率(f)變化
　　大

15、鼠f結果顯示,與對照組比較,痰濕證組、急性組、模型組、非對應組各組大鼠f明顯加快(P<0.05,P<0.01),穩(wěn)定組、對應組無顯著差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　5.2.大鼠吸氣阻力(Rin)變化
　　大鼠Rin結果顯示,與對照組比較,痰濕證組、穩(wěn)定組、急性組、模型組、非對應組、對應組各組大鼠Rin明顯升高(P<0.05);與穩(wěn)定組比較,痰濕證組

16、、急性組、模型組、非對應組大鼠Rin明顯升高(P<0.05),對應組大鼠Rin無顯著差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　5.3.大鼠MV、Vt和PEF變化
　　大鼠MV、Vt和PEF變化結果顯示,與對照組比較,痰濕證組、穩(wěn)定組、急性組、模型組、非對應組各組大鼠MV、Vt和PEF明顯降低(P<0.05,P<0.01),對應組無顯著差異(P>0.05);與

17、穩(wěn)定組比較,急性組、模型組、痰濕證組、非對應組各組大鼠MV、Vt和PEF明顯降低(P<0.05,P<0.01),對應組無顯著差異(P>0.05);與非對應組比較,對應組顯著改善(P<0.05),模型組無顯著差異(P>0.05)。
　　6.大鼠肺組織病理變化
　　普通病理形態(tài)學觀察,對照組大鼠為正常肺組織;COPD穩(wěn)定期組大鼠支氣管炎癥細胞浸潤明顯,見局灶性肺泡隔破壞,多個肺泡相互融合形成肺氣腫;AECOPD組除COPD穩(wěn)定期

18、組所見外,部分肺實變,小動脈周圍水腫明顯,小動脈管壁較明顯增厚;痰濕證組大鼠杯狀細胞增多,粘膜層、粘膜下層大量炎細胞浸潤;AECOPD痰濕證組除AECOPD組所見外,大鼠氣管上皮細胞破壞明顯,支氣管平滑肌增厚,管腔堵塞,部分肺實變;AECOPD痰濕證對應組較AECOPD組和AECOPD痰濕證組明顯減少;AECOPD痰濕證非對應組病理改變與AECOPD痰濕證組比較加重。
　　結論:①本課題基于病證結合的現(xiàn)代中醫(yī)診療模式,在COPD發(fā)

19、病的中、西醫(yī)病因學理論指導下,成功復制了AECOPD痰濕證證大鼠模型。本模型的復制方法綜合了病和證的研制方法,運用了與AECOPD痰濕證證的形成過程中較為密切的多種致病因素,符合AECOPD痰濕證證形成的條件和病機。②通過大鼠肺功能儀檢查、放免測定、普通病理等技術,以多指標、同時觀察的方法,對造模動物進行了實驗觀察及經典中醫(yī)方劑反證,在癥狀表現(xiàn)方面,基本符合該病證的臨床表現(xiàn),微觀指標如肺組織病理形態(tài)學、肺功能、炎癥因子等結果基本符合AE