CD157在結(jié)核患者體內(nèi)的表達水平、作用及其機制的初步探討.pdf

1、目的：
　　1.檢測健康人群、結(jié)核潛伏感染者、肺炎患者、肺結(jié)核患者外周血單個核細胞和血漿中CD157水平，了解CD157在這些人群體內(nèi)的表達情況。
　　2.利用體外細胞模型（結(jié)核分枝桿菌H37Ra感染人外周血的單核巨噬細胞系THP-1、外周血單個核細胞）探討CD157表達增高的作用及其相關(guān)機制。
　　方法：
　　1.利用qPCR檢測各組人群外周血單個核細胞（PBMC）中CD157 mRNA的表達水平；利用ELIS

2、A檢測血漿和配對胸水上清中游離CD157的蛋白水平；流式細胞術(shù)分析CD157在不同細胞表面的表達情況。
　　2.收集結(jié)核性胸膜炎和非結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液，用ELISA檢測上清中游離CD157蛋白水平。
　　3.對部分活動性肺結(jié)核患者進行隨訪，檢測其治療前及治療后3、6、12月外周血PBMC中CD157的mRNA水平，以及血漿中游離CD157濃度的變化情況。
　　4.利用結(jié)核分枝桿菌（結(jié)核桿菌）H37Ra感染THP-

3、1和PBMC細胞，檢測細胞中CD157的表達情況。
　　5.檢測結(jié)核性胸膜炎患者胸水中CD157和γ干擾素（IFN-γ）表達情況，比較兩者相關(guān)性；用結(jié)核性胸膜炎患者和非結(jié)核性胸膜炎患者胸水培養(yǎng)THP-1細胞，加入IFN-γ或中和IFN-γ抗體，檢測其對CD157表達的影響。
　　6.用CD157和結(jié)核桿菌作用于THP-1細胞，觀察CD157對結(jié)核桿菌感染的巨噬細胞分泌趨化因子的能力及其對細胞遷移的影響。
　　結(jié)果：

4、r>　　1. CD157在肺結(jié)核患者體內(nèi)表達升高：在PBMC中，肺結(jié)核患者外周血單個核細胞中CD157mRNA的表達水平顯著高于健康對照組、結(jié)核潛伏感染組和肺炎患者組（P<0.05）；流式結(jié)果顯示，CD157主要表達于單核細胞以及中性粒細胞表面，T細胞表面幾乎不表達，但在肺結(jié)核患者體內(nèi)表達CD157的單核細胞和中性粒細胞的比例與健康對照組相比并沒有顯著性差異；在血漿中，肺結(jié)核患者血漿游離CD157濃度顯著高于結(jié)核潛伏感染組、肺炎對照組和

5、健康對照組（P<0.05）；而CD157mRNA在痰涂片陽性和痰涂片陰性的活動性肺結(jié)核患者中的表達水平并沒有顯著性差異。
　　2.CD157的表達水平隨著抗結(jié)核治療降低：檢測治療后3、6、12月活動性肺結(jié)核患者的外周血中CD157的mRNA水平，以及血漿中游離CD157濃度，結(jié)果顯示，肺結(jié)核患者治療后6個月和12個月外周血中CD157 mRNA表達水平和血漿中CD157濃度顯著降低，相比治療前差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。<

6、br>　　3. CD157在結(jié)核性胸膜炎患者胸水中表達增高：CD157mRNA和游離CD157在結(jié)核性胸膜炎患者胸水中的表達水平顯著高于其在外周血中的表達水平。結(jié)核性胸膜炎患者胸水的游離CD157的含量顯著高于非結(jié)核性胸膜炎患者（P<0.05）。
　　4. CD157可誘導結(jié)核桿菌感染的巨噬細胞分泌CCL2，進而促進細胞遷移：利用CD157和結(jié)核桿菌共作用于THP-1細胞，結(jié)果顯示THP-1細胞中CCL2的表達顯著高于單獨的CD1

7、57或者結(jié)核桿菌作用的細胞（P<0.05）；進一步的細胞遷移（Transwell）實驗表明，CD157和結(jié)核桿菌共作用的THP-1細胞上清可以顯著提高細胞的遷移率，而在細胞上清中加入抗CCL2的中和抗體，這種遷移作用得到了顯著的抑制，表明CD157是通過促進結(jié)核桿菌感染的巨噬細胞中CCL2的表達來調(diào)節(jié)細胞的遷移。
　　5.結(jié)核桿菌通過上調(diào)IFN-γ誘導CD157的表達：結(jié)核桿菌H37Ra感染THP-1和PBMC細胞的CD157mR

8、NA或細胞培養(yǎng)上清中游離CD157表達量并不增高，與對照相比，差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。利用結(jié)核性胸膜炎患者和非結(jié)核性胸膜炎患者胸水作用于THP-1細胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)核性胸膜炎患者胸水作用的THP-1細胞中，CD157mRNA的相對表達水平以及游離CD157的濃度都顯著高于非結(jié)核性胸膜炎患者胸水作用的細胞（P<0.05）。進一步，我們發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核患者中IFN-γ和CD157的表達成正相關(guān)。因此我們利用功能性IFN-γ或者IFN-γ