miR-203在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中的作用及其機制的初步探討.pdf

1、背景和目的：
　　 神經(jīng)膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率高、治愈率低，嚴重危害人類的健康。因此，闡明其發(fā)病機理、尋找新的生物學(xué)標記物及治療靶標以提高治療效果已成為亟待解決的重大課題。本課題旨在以惡性程度較低的A172細胞與惡性程度較高的U87細胞為模型，初步探討miR-203在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞增殖、遷移侵襲及對化療藥物敏感性中的作用及其機制。
　　 方法：
　　 (1)用實時熒光定量PCR檢測miR-203

2、在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞A172和U87中的表達情況;(2)構(gòu)建miR-203表達載體pSilencer2.1-U6-miR-203，用脂質(zhì)體將miR-203表達載體及miR-203抑制劑分別轉(zhuǎn)染U87與A172細胞，用劃痕試驗及Transwell試驗觀察miR-203對遷移侵襲能力的影響，MTS試驗觀察miR-203細胞的增殖能力及對化療藥物替尼泊甙(VM-26)敏感性的影響;(3)生物信息學(xué)分析miR-203的可能作用靶基因為E2F3，We

3、stern blot檢測各細胞中E2F3的表達情況，將E2F3的3'端非翻譯區(qū)(3'UTR)包括miR-203結(jié)合位點、上下游部分側(cè)翼序列以及酶切位點在內(nèi)的共60bp片段分別克隆入pMIR-REPORT熒光素酶報告基因載體，將其分別與β-gal表達質(zhì)粒及miR-203表達載體共轉(zhuǎn)染293T細胞24h后檢測報告基因活性;(4)合成E2F3的反義寡核苷酸片段，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染U87細胞后，Western blot檢測E2F3的蛋白表達，用劃痕試

4、驗及Transwell試驗觀察E2F3干擾對遷移侵襲能力的影響，MTS試驗觀察E2F3干擾后細胞的增殖能力及對化療藥物替尼泊甙(VM-26)敏感性的影響。
　　 結(jié)果：
　　 (1)相比于A172細胞，miR-203在U87細胞中表達下調(diào)8.23+0.390倍;(2) miR-203能明顯抑制U87細胞的增殖及遷移侵襲能力，增加對VM-26的化療敏感性，而抑制miR-203則增加A172細胞的增殖及遷移侵襲能力，降低對V

5、M-26的化療敏感性;(3) E2F3的3'UTR有在物種間保守的miR-203作用位點，miR-203能明顯抑制作用位點介導(dǎo)的熒光素酶活性，同時，miR-203與E2F3的表達呈負相關(guān);(4)下調(diào)E2F3的表達能明顯抑制U87細胞的增殖及遷移侵襲能力，增加對VM-26的化療敏感性。
　　 結(jié)論：
　　 (1) miR-203能抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移侵襲能力，增加對化療藥物的敏感性;(2) miR-203直接靶向