FAP-α在小鼠移植瘤中的表達(dá)及其誘導(dǎo)表達(dá)機(jī)制的初步探討.pdf

1、成纖維細(xì)胞激活蛋白-α(fibroblast activation protein-α，F(xiàn)AP-α)可選擇性地表達(dá)于90％以上的人類肺、乳腺和大腸癌等惡性上皮癌間質(zhì)中的腫瘤成纖維細(xì)胞膜上。近年來，F(xiàn)AP-α，作為抗腫瘤基質(zhì)藥物治療研究中的新靶點(diǎn)正受到關(guān)注。 目前，關(guān)于鼠源性腫瘤間質(zhì)中FAP-a表達(dá)的文獻(xiàn)報(bào)道甚少。本課題擬篩選表達(dá)FAP-a的動(dòng)物腫瘤模型并開展相關(guān)的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究。 目的： 本研究通過篩選表達(dá)FAP

2、-α的小鼠移植性腫瘤模型，研究FAP-α在腫瘤組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其誘導(dǎo)表達(dá)機(jī)制，從而為以FAP-α為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物的研究奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.利用RT-PCR技術(shù)初步篩選表達(dá)FAP-α的動(dòng)物腫瘤模型分別建立小鼠移植性4T1乳腺癌模型和B16黑色素瘤模型，以移植瘤組織的基因組DNA為模板擴(kuò)增FAP-α基因，從mRNA水平上初步篩選表達(dá)FAP-α的動(dòng)物腫瘤模型。 2.FAP-α在腫瘤組織中表達(dá)檢測分別以4T1細(xì)胞

3、和4T1腫瘤組織基因組DNA為模板擴(kuò)增FAP-α基因，在mRNA水平上檢測腫瘤細(xì)胞與腫瘤組織表達(dá)FAP-α的情況。進(jìn)一步應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測4T1腫瘤組織中FAP-α的表達(dá)特點(diǎn)。 3.體外誘導(dǎo)FAP-α表達(dá)的探索原代培養(yǎng)大鼠成纖維細(xì)胞，光鏡下觀察其與4T1形態(tài)學(xué)差異。收集腫瘤細(xì)胞上清液、腫瘤細(xì)胞勻漿、腫瘤細(xì)胞膜、腫瘤細(xì)胞懸液，分別與成纖維細(xì)胞共孵育24h；建立Transwell共培養(yǎng)體系。應(yīng)用RT-PCR、免疫組化和Wester

4、n Blot技術(shù)檢測上述共培養(yǎng)體系FAP-α誘導(dǎo)表達(dá)的情況。 結(jié)果： 1.建立了小鼠4T1乳腺癌模型和B16黑色素瘤模型，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)，初步在mRNA水平上檢測4T1腫瘤組織、B16腫瘤組織表達(dá)FAP-a的情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FAP-α在4T1腫瘤組織表達(dá)，而在B16腫瘤組織中未見表達(dá)；其次分別以4T1乳腺癌細(xì)胞系和4T1腫瘤組織總RNA為模板擴(kuò)增FAP-α基因片段，發(fā)現(xiàn)FAP-α在腫瘤組織中表達(dá)而在腫瘤細(xì)胞中不表達(dá)；

5、最后利用免疫組化技術(shù)在蛋白水平上檢測到在4T1腫瘤組織中，F(xiàn)AP-α表達(dá)于腫瘤間質(zhì)中，而在腫瘤細(xì)胞中未見表達(dá)。 2.原代分離培養(yǎng)大鼠成纖維細(xì)胞，建立腫瘤細(xì)胞與成纖維細(xì)胞體外共培養(yǎng)模型，并通過RT-PCR、免疫組化和Western Blot檢測證實(shí)了只有在腫瘤細(xì)胞與成纖維細(xì)胞直接接觸共培養(yǎng)后，才能誘導(dǎo)后者FAP-α的表達(dá)。 結(jié)論： 1.通過基因和蛋白水平的研究證實(shí)了小鼠4T1移植瘤組織表達(dá)FAP-α，且其表達(dá)來源于

6、腫瘤間質(zhì)而非腫瘤細(xì)胞，與FAP-α在人體腫瘤中的表達(dá)特點(diǎn)相似，為以FAP-α為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物研究提供了理想的動(dòng)物模型。 2.利用腫瘤細(xì)胞與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)方法成功地在體外模擬了腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)生長的微環(huán)境，證實(shí)了腫瘤細(xì)胞與成纖維細(xì)胞接觸是誘導(dǎo)后者表達(dá)FAP-α的必要條件。由此，本文推測誘導(dǎo)FAP-α表達(dá)是通過細(xì)胞表面分子的相互作用所實(shí)現(xiàn)，并且在鼠類(小鼠、大鼠)中其誘導(dǎo)分子及誘導(dǎo)機(jī)制相似。為進(jìn)一步探索FAP-α誘導(dǎo)表達(dá)機(jī)制和開展