雞IGF-Ⅰ對(duì)成骨細(xì)胞功能的影響及其基因多態(tài)性與蛋雞骨代謝相關(guān)性的研究.pdf

1、　　籠養(yǎng)蛋雞骨質(zhì)疏松癥是以全身漸進(jìn)性結(jié)構(gòu)骨丟失及骨脆性增加和易于發(fā)生骨折為特征的一種嚴(yán)重骨骼性疾病。籠養(yǎng)、營(yíng)養(yǎng)、遺傳、內(nèi)分泌等對(duì)本病的發(fā)生均有一定的作用，但其確切作用機(jī)制仍不明了。鑒于IGF-Ⅰ是骨骼中最豐富的生長(zhǎng)因子、并對(duì)骨重建動(dòng)態(tài)平衡起著重要的調(diào)節(jié)作用，本文從IGF-Ⅰ的成骨細(xì)胞生物學(xué)功能及IGF-Ⅰ遺傳多態(tài)性兩個(gè)方面展開研究，旨在部分闡明籠養(yǎng)蛋雞骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生機(jī)制。 1、雞胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)

2、　　結(jié)果表明，擴(kuò)增片段為含有信號(hào)肽的雞IGF-Ⅰ完整基因，與GenBank上登錄的雞IGF-Ⅰ(M-32791)同源性為100﹪。在此基礎(chǔ)上，亞克隆雞IGF-Ⅰ成熟蛋白編碼基因，然后構(gòu)建了雞IGF-Ⅰ原核單純表達(dá)載體pRLC-IGF-Ⅰ，再通過溫度誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)了重組雞IGF-Ⅰ成熟蛋白的表達(dá)，經(jīng)Tricine-SDS-PAGE電泳分析，原核表達(dá)產(chǎn)物為7.6KD的重組蛋白，薄層掃描顯示IGF-Ⅰ占菌體總蛋白的23﹪。重組雞IGF-Ⅰ的獲得為進(jìn)

3、一步研究其生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。 2、雞IGF-1重組蛋白的變、復(fù)性研究及生物學(xué)活性測(cè)定　　結(jié)果表明：重組雞IGF-Ⅰ在100-800ng/mL范圍內(nèi)，顯著促進(jìn)NIH3T3和雞胚成纖維細(xì)胞的增殖作用。結(jié)論：重組IGF-Ⅰ具有較高的生物學(xué)活性。 3、雞胚額骨成骨細(xì)胞分離培養(yǎng)及重組雞IGF-Ⅰ對(duì)其促增殖作用的研究　　在建立雞胚額骨成骨細(xì)胞培養(yǎng)方法的基礎(chǔ)上，體外直接研究重組雞IGF-Ⅰ對(duì)蛋雞成骨細(xì)胞增殖和分化功能的影響。

4、顯著促進(jìn)雞胚額骨成骨細(xì)胞的增殖和分化，并呈劑量依賴關(guān)系。 4、rcIGF-Ⅰ對(duì)雞胚額骨成骨細(xì)胞骨相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響　　rcIGF-Ⅰ可以在轉(zhuǎn)錄水平上增加雞胚額骨成骨細(xì)胞骨相關(guān)基因的表達(dá)，并呈明顯的劑量依賴關(guān)系，提示：IGF-Ⅰ促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖、分化的作用可能是通過增加骨相關(guān)基因的表達(dá)水平來實(shí)現(xiàn)的。 5、雞胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ基因多態(tài)性與體重、骨代謝相關(guān)性的研究　　研究表明：whiteleghorn籠養(yǎng)蛋雞