吉富羅非魚IGF2基因分離及其多態(tài)性與魚體型、增重相關(guān)性研究.pdf

1、胰島素樣生長因子2(Insulin-like growth factor2, IGF2)是控制動(dòng)物生長和脂肪沉積的重要基因之一。本文分離了吉富羅非魚(Genetic Improved FarmedTilapia， GIFT)IGF2基因6746 bp，包含有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子，開放閱讀框?yàn)?69 bp，編碼222個(gè)氨基酸，5’非翻譯區(qū)379 bp,3’非翻譯區(qū)892 bp。氨基酸同源性比較表明，與魚類同源性為64.1％-98.6％，

2、與哺乳動(dòng)物同源性為59.9％-63.2％。
　　 通過比對(duì)吉富羅非魚10個(gè)體IGF2基因序列，以同一位點(diǎn)不同堿基出現(xiàn)的比例大于3/7，確定潛在的多態(tài)位點(diǎn)，結(jié)果共尋找到12處多態(tài)位點(diǎn)，其中11處為SNPs位點(diǎn)，1處為微衛(wèi)星位點(diǎn)。本文建立了檢測(cè)內(nèi)含子1621nt C/T、外顯子287nt T/G、外顯子3161nt A/G和內(nèi)含子3微衛(wèi)星位點(diǎn)共4個(gè)位點(diǎn)基因型的方法，調(diào)查了192尾吉富羅非魚的基因型，并分析不同基因型與體型、增重的相關(guān)

3、性。使用四引物擴(kuò)增受阻體系PCR(tetra-primer PCR method and the amplificationrefractory mutation system, Tetra-primers ARMS)檢測(cè)內(nèi)含子1621nt基因型，結(jié)果顯示，CC、CT、TT基因型頻率在雄魚中分別為0.32、0.32、0.36，在雌魚中分別為0.38、0.38、0.24;與體型、增重的相關(guān)性分析表明，此位點(diǎn)不同基因型只與雄魚體型（體高/體

4、長）顯著相關(guān)(p＜0.05), CC型個(gè)體顯著高于CT和TT型個(gè)體。外顯子287nt T/G顛換導(dǎo)致了HinfⅠ酶切位點(diǎn)改變，使用PCR-RFLP法檢測(cè)該位點(diǎn)基因型，結(jié)果顯示整個(gè)試驗(yàn)群體中不存在GG基因型，雄魚中，TT和TG基因型頻率分別為0.33和0.67，而雌魚群體中則為0.56和0.44;與體型、增重的相關(guān)性分析表明，此位點(diǎn)與雄魚體型（體高/體長）顯著相關(guān)(p＜0.05)， TT型個(gè)體體高/體長值顯著高于TG型個(gè)體。外顯子3A/G

5、轉(zhuǎn)換導(dǎo)致了MspⅠ酶切位點(diǎn)改變，使用PCR-RFLP法檢測(cè)該位點(diǎn)基因型，結(jié)果顯示整個(gè)群體中不存在AA基因型，在雄魚中，GG、AG基因型頻率分別為0.71、0.29，而雌魚中則為0.75和0.25;與體型、增重的相關(guān)性分析表明，此位點(diǎn)不同基因型只與雄魚增重極顯著相關(guān)(p＜0.01), GG型的雄魚明顯較AG型增重快。使用PAGE電泳區(qū)分內(nèi)含子3微衛(wèi)星位點(diǎn)的不同等位基因，結(jié)果共有5種等位基因，13種基因型，雄魚群體中，基因型頻率為0-0.2