乙型肝炎病毒負(fù)性調(diào)節(jié)元件亞元件的鑒定及功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：鑒定HBV nt250-453負(fù)性調(diào)節(jié)元件中存在的重要功能亞元件；研究HBV nt250-453負(fù)性調(diào)節(jié)元件對HBV復(fù)制的影響。 方法：構(gòu)建包含HBV nt453-434、nt403-384和nt283-264序列的蟲熒光素酶基因表達(dá)質(zhì)粒，分別與內(nèi)參海參熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，利用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)，檢測蟲熒光素酶的表達(dá)情況。逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測蟲熒光素酶基因的mRNA水平。 結(jié)果：與pGL3-c

2、ontrol組比較，含有單個亞元件的重組質(zhì)粒組相對熒光素酶活性降低，分別為79.66％、80.79％、78.36％；含有2個亞元件的重組質(zhì)粒組進(jìn)一步降低至55.83％、56.27％、61.44％；含有3個亞元件的重組質(zhì)粒組的相對熒光素酶活性明顯降低，為pGL3-control組的38.83％。逆轉(zhuǎn)錄PCR.顯示熒光素酶的mRNA水平降低，與熒光素酶活性檢測結(jié)果相符合；Southern雜交檢測到HBV DNA復(fù)制中間體，與轉(zhuǎn)染野生型質(zhì)粒L

3、J196+LJ96組相比較，轉(zhuǎn)染突變質(zhì)粒MLJ196+LJ96組的HBVrcDNA條帶無明顯差別。陰性對照組無雜交信號。 結(jié)論：HBV nt453-434、nt403-384和nt283-264序列為HBVnt250-453負(fù)性調(diào)節(jié)元件中發(fā)揮關(guān)鍵作用的三個亞元件；這三個亞元件可以獨立發(fā)揮作用；當(dāng)以協(xié)同的方式發(fā)揮作用時，則表現(xiàn)出最強(qiáng)的負(fù)性調(diào)節(jié)作用；HBV nt250-453負(fù)性調(diào)節(jié)元件對形成HBV復(fù)制中間體無影響，推測該負(fù)性調(diào)節(jié)元

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