間接ELISA檢測IBV DNA疫苗免疫抗體及IBV M基因表達研究.pdf

1、本研究采用差速離心和密度梯度離心技術純化禽傳染性支氣管炎病毒(IBV)，用純化的IBV作包被抗原，建立了檢測IBVDNA疫苗免疫后雞血清中特異性抗體的間接ELISA方法。確定了抗原最佳包被濃度為5μg/ml,待檢血清稀釋度為1：320，酶標抗體的最佳稀釋度為1：10000，血清樣品陰、陽性判斷臨界值S/N為1.27?！　瞄g接ELISA方法檢測IBVDNA疫苗免疫抗體，結果表明：IBV的S1、M、N基因DNA疫苗單獨免疫或混合免疫均

2、能刺激機體產生特異性抗體；且DNA疫苗各組抗體水平極顯著(P＜0.01)高于空白對照組和空質粒對照組。強毒攻毒實驗結果表明：IBV的各DNA疫苗對強毒攻擊都有保護率，保護率分別是S1基因40％(8/20)、M基因70％(14/20)、N基因70％(10/14)，三基因混合DNA疫苗90％(18/20)。結合抗體檢測結果分析得出：三基因混合DNA疫苗免疫效果優(yōu)于單基因DNA疫苗免疫效果；單基因DNA疫苗中，M基因疫苗和N基因疫苗優(yōu)于S1基

3、因疫苗?！　「鶕菊n題組設計了一對引物，采用RT-PCR方法，獲得了IBV分離株膜蛋白基因(M)的融合表達片段，并將其克隆到pMD18-T載體測序。將此片段插入大腸桿菌原核表達載體pET30b(+)中，構建了表達IBVM基因的重組真核表達質粒pET30-M，轉化入大腸桿菌BL21(DE3)，并經IPTG進行誘導表達。表達產物經SDS-PAGE和Westernblotting分析表明：M基因在大腸桿菌中獲得了表達，表達蛋白分子量約為26