桑黃水溶性多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)的初步研究.pdf

1、本文對(duì)桑黃(Phellinus igniarius(L.：h)Quél)菌絲體多糖的提取分離進(jìn)行了研究，建立了菌絲體多糖和發(fā)酵液多糖的純化路線，并對(duì)其中三種水溶性多糖的理化性質(zhì)進(jìn)行了測定。 本論文采用正交試驗(yàn)，分別研究了熱水浸提法、微波輔助法和超聲波法提取桑黃菌絲體粗多糖的最優(yōu)工藝，根據(jù)極差分析和實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況確定了熱水浸提法的最優(yōu)工藝為浸提時(shí)間3小時(shí)、浸提3次、液料比50、浸提溫度90℃，多糖提取率為2.10％；微波提取法的最

2、優(yōu)工藝為微波處理15min、液料比50、提取3次，提取率為4.18％；超聲提取法的最優(yōu)工藝為超聲30min、提取2次、液料比60、溫度60℃、頻率60Hz，提取率為3.02％。以多糖損失率和脫蛋白率為衡量指標(biāo)，選用了3種比較常見的方法：Sevag法、三氯醋酸法及三氯醋酸和酶結(jié)合法對(duì)桑黃水溶性粗多糖進(jìn)行脫蛋白處理。結(jié)果為Sevag法、三氯醋酸法及三氯醋酸和酶結(jié)合法的脫蛋白率分別為82.4％、71.3％、79.6％，多糖損失率分別為51.5

3、％、8.9％、9.8％。結(jié)果表明三氯醋酸和酶結(jié)合法最適合實(shí)驗(yàn)室范圍操作，最佳工藝為三氯醋酸用量10％、作用15min、酶加入量1.2％。 將桑黃多糖依次采用分級(jí)醇沉、脫色、透析等分離純化方法分別得到：菌絲體多糖組分P11、P12，其產(chǎn)率為13.5％、12.4％：發(fā)酵液多糖組分P13，其產(chǎn)率為15.9％。經(jīng)葡聚糖凝膠G-100層析柱分離得到組分PI11、PI21和PI31，多糖純度為98.7％、99.5％和98.9％，再用反復(fù)凍融

4、法和凝膠柱層析法證明此三種組分為分子量均一的純多糖。 對(duì)三種純多糖進(jìn)行了理化性質(zhì)的分析，三者在Molish反應(yīng)中均呈陽性，紅外光譜測定結(jié)果顯示其都有多糖的特征吸收峰，證明其為糖，碘反應(yīng)呈陰性，說明不含連續(xù)的α(1→4)糖苷鍵，且光譜顯示其構(gòu)型都為β型。不溶于乙醇、丙酮和乙醚等有機(jī)溶劑，但易溶于水，尤其易溶于熱水。260nm及280nm處均無紫外吸收，表明其不含核酸和蛋白質(zhì)。PI11、PI21和PI31的分子量分別為65000、3

5、0000和12000。通過氣相圖譜分析判斷三種純化多糖均含有木糖、甘露糖，巖藻糖，葡萄糖和半乳糖。PI11中木糖、甘露糖、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖的摩爾比為5.2:1:10.2:9.24:30.1；P121中木糖、甘露糖、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖的摩爾比為0.08:1:4.6:6.9:14.1；PI31中木糖、甘露糖、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖的摩爾比為2.3:1:6.4:22.1:19.8。 本研究的目的是為了建立一條符合實(shí)際、簡便易