松茸多糖的分離純化與抗腫瘤活性的研究.pdf

1、松茸是一種寶貴的食藥用真菌,味道鮮美,營養(yǎng)豐富,所含多糖具有良好的抗腫瘤、增強免疫等活性。但目前對松茸的研究多集中于對松茸生長和菌絲體糖蛋白類物質(zhì)的研究。本文以松茸子實體作為研究對象,對松茸多糖的提取工藝進行優(yōu)化,分離純化得到純多糖,對其進行了酶解；并分別對粗多糖、純多糖和修飾后多糖的抗腫瘤活性進行了初步研究。具體內(nèi)容如下：確定了松茸多糖的較優(yōu)提取工藝為料液比1：30,在90℃下,浸提3h,提取次數(shù)以2次(提取比例為94.3%)為宜；乙

2、醇沉淀的優(yōu)化條件為3倍體積95%乙醇沉淀6h。采用Sevag法脫蛋白,通過脫色率和多糖損失率兩個指標(biāo),比較活性炭、過氧化氫、大孔樹脂三種脫色方法,確定大孔樹脂法是其中最佳的脫色方法(脫色率為54.72%,多糖損失率為37.84%)。經(jīng)過截留分子量為8000~1000的透析袋透析后,進行DEAE-52纖維素層析,得到洗脫液濃度分別為0、0.2mol/L、0.5mol/L NaCl溶液時的三個組分：松茸水提多糖( TMWEP-1、TMWEP

3、-2、TMWEP-3)。對含量較高的組分TMWEP-2進行Sephadex G-100凝膠層析,用水洗脫,得到兩個亞級組分：TMWEP-2Ⅰ和TMWEP-2Ⅱ。通過Sephadex G-100凝膠層析和高校液相色譜分析,對TMWEP-2Ⅰ進行純度鑒定,證明該組分是分子量分布均勻的純多糖。對得到的純多糖TMWEP-2Ⅰ進行薄層層析、紫外光譜分析和紅外光譜分析。確定了用蝸牛酶降解松茸多糖的優(yōu)化條件為：酶解時間5h,酶與底物比1：5,溫度40

4、℃,pH值6.0。分別對松茸多糖的粗多糖、純多糖組分TMWEP-2Ⅰ以及蝸牛酶降解多糖進行了體外抗腫瘤活性的研究。選用SGC-7901、Hela、HT-29三種腫瘤細(xì)胞,分10μg/mL、100μg/mL、1000μg/mL三個濃度梯度,用CCK-8法測定多糖對腫瘤細(xì)胞的抑制率。結(jié)果表明：松茸多糖對三種腫瘤細(xì)胞具有抑制作用,抑制率隨著純度和濃度的提高而提高,降解后的多糖沒有直接抗腫瘤活性。本文對松茸多糖的分離純化及抗腫瘤活性的研究擴展了