孕期肥胖對(duì)子代心功能異常程序化的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　第一部分、孕期肥胖對(duì)胎鼠心臟結(jié)構(gòu)和心肌細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制研究
　　目的：孕期肥胖通過(guò)影響AT1R和AT2R的表達(dá)來(lái)探討胎鼠心臟結(jié)構(gòu)和心肌細(xì)胞增殖改變的機(jī)制。
　　方法：
　　在SD雌鼠妊娠期第1~21天給予高脂飲食,建立妊娠期肥胖動(dòng)物模型。取21天乳鼠心臟進(jìn)行原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)，利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞的細(xì)胞周期。透射電鏡觀察21天胎鼠心臟超微結(jié)構(gòu)的變化；Western-blot法檢

2、測(cè)心肌組織AT1R和AT2R蛋白表達(dá)的情況； RT-PCR法檢測(cè)AT1R和AT2R mRNA的表達(dá)情況；染色質(zhì)免疫沉淀方法和GR抗體提取GR-GRE復(fù)合物進(jìn)行 RT-PCR擴(kuò)增檢測(cè)GR與GRE結(jié)合力情況。
　　結(jié)果：
　　1.與對(duì)照組相比，妊娠期第1天，肥胖組的孕鼠體重?zé)o顯著性差異，但在妊娠期第21天，肥胖組的孕鼠體重顯著增加（P<0.05）。
　　2.肥胖組和對(duì)照組胎鼠的心臟重量與體重沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但肥胖組胎鼠心臟

3、體重的比值明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。
　　3.與對(duì)照組相比，肥胖組胎鼠心肌細(xì)胞在 G1期細(xì)胞數(shù)量明顯增加，而 S期和G2期，心肌細(xì)胞數(shù)量顯著減少（P<0.05）。
　　4.孕期肥胖改變胎鼠心臟超微結(jié)構(gòu)，包括肌原纖維排列紊亂，微絲模糊，變小，甚至消失；線粒體腫脹，線粒體嵴部分或全部消失，線粒體呈空泡化。
　　5. Western-blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，肥胖組胎鼠心臟AT1R蛋白表達(dá)水平明顯降低，而AT2R

4、蛋白水平顯著升高（P<0.05）。
　　6.RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，肥胖組胎鼠心臟AT1aR mRNA水平明顯降低；而AT2R mRNA水平顯著升高（P<0.05）。
　　7. Western-blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，肥胖組胎鼠心臟GR總蛋白、GR核蛋白和GR mRNA水平顯著降低（P<0.05）。
　　8. ChIP結(jié)果顯示在孕期肥胖減少AT1R和AT2R啟動(dòng)子上GRE與GR的結(jié)合。
　　小

5、結(jié)：
　　1.孕期肥胖導(dǎo)致胎鼠心臟超微結(jié)構(gòu)（包括肌原纖維紊亂、線粒體腫脹、線粒體嵴消失甚至空泡化）的改變和心肌細(xì)胞增殖的抑制，這可能與血管緊張素Ⅱ受體的改變有關(guān)。
　　2.孕期肥胖降低胎鼠心臟AT1aR和AT2R啟動(dòng)子上GR與GRE的結(jié)合，導(dǎo)致胎鼠心臟血管緊張素Ⅱ受體的改變。
　　第二部分、孕期肥胖對(duì)成年子代心功能異常程序化的影響及其機(jī)制研究
　　目的：孕期肥胖通過(guò)影響AT1R和AT2R的表達(dá)以及對(duì)子代大鼠心肌缺

6、血再灌注損傷來(lái)探討孕期肥胖導(dǎo)致成年子代鼠心臟功能異常的機(jī)制，并且確定是否存在性別差異。
　　方法：
　　在SD雌鼠妊娠期第1~21天給予高脂飲食,建立妊娠期肥胖動(dòng)物模型。出生后，肥胖組和對(duì)照組母鼠正常飲食，子代大鼠同等條件下飼養(yǎng)至3個(gè)月齡作為實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物。小動(dòng)物超聲成像系統(tǒng)檢測(cè)成年子代大鼠心臟功能；子代大鼠心臟建立langendroff系統(tǒng)檢測(cè)大鼠心臟缺血再灌注損傷的敏感性；TTC法測(cè)定子代大鼠缺血再灌注后心臟梗死面積；LDH

7、試劑盒測(cè)定灌流液中LDH的活性；EIA法測(cè)定子代大鼠血清Ang II含量；Western blot法檢測(cè)子代大鼠心肌組織AT1R和AT2R蛋白表達(dá)的情況；RT-PCR法檢測(cè)AT1R和AT2R mRNA的表達(dá)；染色質(zhì)免疫沉淀方法和GR抗體提取 GR-GRE復(fù)合物進(jìn)行 RT-PCR擴(kuò)增檢測(cè)GR與GRE結(jié)合力情況。
　　結(jié)果：
　　1.結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，肥胖組子代雄性大鼠的體重沒(méi)有變化，而心臟重量和心臟體重比值顯著升高（P<0

8、.05），而雌性大鼠體重、心臟重量和心臟體重比值均沒(méi)有改變。
　　2.超聲結(jié)果顯示在短軸M模式下測(cè)量子代大鼠收縮功能，與對(duì)照組相比，肥胖組子代雄性大鼠的左心室舒張期前壁厚度（LVAW;d）、左心室收縮期前壁厚度（LVAW;s）、左心室舒張期后壁厚度（LVPW;d）、左心室收縮期后壁厚度（LVPW;s）、左心室射血分?jǐn)?shù) EF（％）和左心室短軸縮短速率 FS（%）均顯著增加，而左室舒張末期內(nèi)徑（LVID;d）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVI

9、D;s）明顯減少（P<0.05）。而肥胖組子代雌性大鼠室壁厚度和心室內(nèi)徑均無(wú)顯著差異。
　　3.在二尖瓣灌流測(cè)量模式下測(cè)量子代大鼠舒張功能，肥胖組子代雄性大鼠和雌性大鼠的舒張功能均沒(méi)有改變。測(cè)量的指標(biāo)有MVA, MVE, E/A ratio, DT, IVRT, and ET。
　　4.孕期肥胖加重子代雄性大鼠心臟缺血再灌注心功能的損傷、梗死面積和灌流液中LDH的活性（P<0.05）。而子代雌性大鼠心臟則沒(méi)有改變。
　

10、　5.孕期肥胖增加子代雄性大鼠血清中AngII的含量（P<0.05），而雌性大鼠則沒(méi)有變化。孕期肥胖增加子代雄性大鼠心臟 AT2R蛋白和mRNA的表達(dá)（P<0.05），而雌性大鼠心臟則沒(méi)有改變。然而，孕期肥胖對(duì)子代雄性和雌性大鼠心臟AT1R的表達(dá)沒(méi)有任何影響。
　　6.拮抗AT2R的表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)孕期肥胖增加子代雄性大鼠心肌缺血再灌注損傷敏感性。
　　7.孕期肥胖降低子代雄性大鼠心臟AT2R啟動(dòng)子上GR與GRE的結(jié)合，這是由于

11、雄性大鼠心臟GR核蛋白量的減少和結(jié)合力的降低導(dǎo)致的。
　　小結(jié)：
　　1.孕期肥胖沒(méi)有改變子代心臟收縮和舒張功能，但發(fā)現(xiàn)子代有心肌肥厚的傾向，并且存在性別差異。
　　2.孕期肥胖通過(guò)下調(diào)GR的表達(dá)來(lái)增加AT2R基因的表達(dá)，從而增加子代缺血再灌注損傷的敏感性，并且存在性別差異。
　　全文結(jié)論：
　　本研究采用妊娠期肥胖動(dòng)物模型探討了血管緊張素II受體在孕期肥胖對(duì)子代心功能影響中的作用。孕期肥胖改變胎鼠心臟結(jié)構(gòu)