菩人丹超微粉對糖尿病大鼠視網膜Ang-2、TNF-α表達的影響.pdf

1、目的:
　　通過觀察菩人丹超微粉(Purendansuperfinepowder,PRD)對糖尿病大鼠視網膜血管生成素2(Angiopoietin-2,Ang-2)和腫瘤壞死因子α(Tumornecrosisfactor-α,TNF-α)表達的影響,探討PRD對糖尿病大鼠視網膜微血管病變的保護作用。
　　方法:
　　36只Wistar大鼠按隨機原則分為3組:正常對照組、糖尿病模型組和PRD治療組,每組12只大鼠。糖尿病

2、模型組和PRD治療組大鼠均采用2％STZ(25mg/kg·d)連續(xù)腹腔注射3天,建立2型糖尿病大鼠模型。以大鼠血糖≥16.7mmol/L作為成模判定標準。模型成功建立后,PRD治療組大鼠按PRD1.8g/kg·d標準灌胃給藥,糖尿病模型組大鼠按同樣標準給于不含PRD的溶劑灌胃,連續(xù)灌胃12周。正常對照組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)不做處理。采用ONETOUCH血糖儀檢測各組大鼠的血糖水平;采用蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosinsta

3、ining,HE)觀察大鼠視網膜形態(tài)學變化;采用SP免疫組織化學染色法和Westernblot法檢測大鼠視網膜Ang-2蛋白的表達;采用Westernblot法和逆轉錄聚合酶鏈反應(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)法檢測大鼠視網膜TNF-α蛋白和mRNA的表達。
　　結果:
　　1.各組大鼠的血糖水平:糖尿病模型組大鼠血糖為21.63±1.01mmol/

4、L,與正常對照組大鼠的血糖4.57±0.42mmol/L相比顯著升高(P<0.01);PRD治療組大鼠血糖為14.60±0.95mmol/L,明顯低于糖尿病模型組大鼠的血糖(P<0.01)。
　　2.各組大鼠視網膜組織病理學改變:正常對照組大鼠視網膜層次清晰,結構完整,內界膜表面平滑,各級神經細胞排列整齊有序,大小均勻。糖尿病模型組大鼠視網膜可見內界膜表面粗糙不平,明顯腫脹增厚、部分內界膜破裂,偶見突出于內界膜的毛細血管內皮細胞,

5、視網膜層次清晰欠佳,神經節(jié)細胞排列紊亂,細胞數量減少,可見細胞空泡樣變、核固縮等現象。PRD治療組視網膜內界膜表面粗糙欠平,輕度腫脹增厚、視網膜分層較清晰,神經節(jié)細胞排列輕度紊亂,細胞數量輕度減少。
　　3.各組大鼠視網膜Ang-2的表達
　　3.1.SP免疫組織化學染色結果:Ang-2蛋白免疫陽性產物呈棕黃色顆粒狀,表達位于細胞漿。Ang-2表達陽性細胞主要分布在大鼠視網膜神經節(jié)細胞層及內核層。與正常對照組相比糖尿病模型組

6、胞漿Ang-2免疫陽性產物呈深棕黃色;PRD治療組Ang-2免疫陽性產物表達較糖尿病模型組明顯減弱,胞漿呈棕黃色。
　　3.2.采用MiVnt圖像分析系統(tǒng)對免疫組化陽性表達面積進行定量分析結果:與正常對照組相比糖尿病模型組陽性表達面積明顯增加(P<0.01);PRD治療組與糖尿病模型組相比,陽性表達面積減少(P<0.01)。
　　3.3.Westernblot法檢測Ang-2蛋白表達結果:與正常對照組比較,糖尿病模型組大鼠視

7、網膜Ang-2蛋白表達明顯升高(P<0.01);PRD治療組大鼠視網膜Ang-2蛋白的表達與糖尿病模型組比較明顯降低(P<0.01)。
　　4.各組大鼠視網膜TNF-α的表達
　　4.1.Westernblot法檢測TNF-α蛋白表達結果:與正常對照組比較,糖尿病模型組大鼠視網膜TNF-α蛋白的表達明顯升高(P<0.01);PRD治療組大鼠視網膜TNF-α蛋白的表達與糖尿病模型組比較明顯降低(P<0.01)。
　　4.

8、2.RT-PCR檢測TNF-αmRNA表達結果:與正常對照組比較,糖尿病模型組大鼠視網膜TNF-αmRNA的表達明顯升高(P<0.01);PRD治療組大鼠視網膜TNF-αmRNA的表達與糖尿病模型組比較明顯降低(P<0.01)。
　　結論:
　　PRD可以改善糖尿病大鼠視網膜病變,這一作用可能是通過下調糖尿病大鼠視網膜Ang-2和TNF-α的表達,從而減少視網膜微血管滲漏及病理性新生血管生成,發(fā)揮其對糖尿病大鼠視網膜微血管損