人肺癌細(xì)胞的STAT3信號(hào)傳導(dǎo)途徑的研究.pdf

1、目的: 以人肺腺癌A549細(xì)胞株，A549/CARP耐藥株為研究對(duì)象，采用免疫組化法和免疫印跡法（Western Blotting）分別測(cè)定A549及A549/CARP中信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化蛋白3（STAT3）、肺耐藥蛋白（LRP）、多藥耐藥蛋白（MRP）的蛋白表達(dá)情況，探明STAT3與肺癌細(xì)胞增殖分化、抗凋亡作用與耐藥之間的關(guān)系。方法: 以不同濃度卡鉑誘導(dǎo)A549產(chǎn)生細(xì)胞耐藥株,MTT法檢驗(yàn)其細(xì)胞耐藥性，采用免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A549和A

2、549/CARP細(xì)胞中STAT3、LRP、MRP表達(dá)情況；分別提取A549、A549/CARP細(xì)胞胞漿蛋白和核蛋白，通過(guò)SDS-PAGE和Western Blotting試驗(yàn)鑒定STAT3、LRP、MRP的表達(dá)蛋白。結(jié)果: 成功誘導(dǎo)了A549/CARP耐藥細(xì)胞株。免疫組化結(jié)果示①A549組、A549/CARP組STAT3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為146.53±23.41和166.73 ±43.06（P>0.05），二者無(wú)顯著性差異；②A549組、

3、A549/CARP組LRP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為119.93±42.10和172.67±44.89（P<0.01），二者有顯著性差異；③A549組、A549/CARP組MRP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為112.40±35.07和151.73±33.92（P<0.01），二者有顯著性差異；④STAT3與LRP無(wú)相關(guān)性（r=-0.321,P>0.05）、STAT3與MRP無(wú)相關(guān)性（r=-0.254,P>0.05）；⑤LRP與MRP表達(dá)間無(wú)相關(guān)關(guān)系（r=0.0

4、61,P>0.05）。Western Blotting實(shí)驗(yàn)證實(shí)在A549組、A549/CARP組胞漿內(nèi)有STAT3的表達(dá)，二者無(wú)顯著性差異，未檢測(cè)到LRP、MRP的表達(dá)。結(jié)論：①A549/CARP耐藥株的建立可作為尋找和篩選抗耐藥腫瘤藥物的模型；②STAT3在A549與A549/CARP兩組中表達(dá)均增加，提示STAT3參與了NSCLC的增殖分化和抗凋亡作用；同時(shí)A549與A549/CARP的表達(dá)無(wú)顯著性差異則提示STAT3并未參與介導(dǎo)N

5、SCLC的耐藥；③LRP在A549中表達(dá)增加，在A549/CARP呈高表達(dá)；MRP在A549中表達(dá)增加，在A549/CARP呈高表達(dá)；提示LRP、MRP均參與了誘導(dǎo)NSCLC的耐藥，但二者之間無(wú)相關(guān)性；④STAT3與LRP、MRP的表達(dá)無(wú)相關(guān)性，提示LRP、MRP介導(dǎo)的耐藥機(jī)制與STAT3信號(hào)傳導(dǎo)途徑無(wú)關(guān)；⑤活化的STAT3對(duì)腫瘤細(xì)胞的形成、生長(zhǎng)、凋亡抑制等過(guò)程起著重要的調(diào)控作用，因此可通過(guò)破壞STAT3信號(hào)傳導(dǎo)來(lái)控制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增