華蟾素誘導急性單核細胞白血病凋亡的體外研究.pdf

1、目的: 研究(體外)中藥華蟾素對急性單核細胞白血病細胞株U937增殖的抑制作用,及其誘導U937細胞株凋亡的作用,并初步探討其可能的機制.進一步研究華蟾素協(xié)同拓撲異構酶Ⅱ抑制劑(etoposide,VP16)對急性單核細胞白血病原代細胞的凋亡誘導作用,從而為臨床應用華蟾素提供體外實驗的證據(jù).方法: ①通過MTT比色分析華蟾素對U937增殖的抑制作用,通過概率單位回歸分析計算華蟾素對U937細胞株的半數(shù)致死劑量(IC50);通過相關分析證

2、實該抑制與華蟾素劑量及作用時間的相關性;②通過Wright's染色、Hoechst33258熒光染色觀察凋亡細胞特征的形態(tài)學改變;③通過瓊脂糖(Agarose)凝膠電泳、末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)原位標記兩個特異的方法,檢測DNA分解片段的產(chǎn)生;④通過流式細胞儀的方法定量檢測磷脂酰絲氨酸(PS)外化的AnnexinVF-FITC陽性細胞百分數(shù);⑤通過流式細胞儀的方法,檢測華蟾素作用后U937細胞株Bcl-2的表達量;⑥通過RT-P

3、CR半定量的方法,檢測華蟾素作用后U937細胞株Fas、FasL的表達;⑦通過ELISA的方法,檢測華蟾素作用不同時間內(nèi)U937細胞株的c-AMP含量,初步探討華蟾素誘導U937凋亡的可能機制;⑧應用上述方法,檢測華蟾素協(xié)同VP16對急性單核細胞白血病患者細胞的凋亡誘導作用,通過2×2析因?qū)嶒灧讲罘治龅姆椒?統(tǒng)計兩藥協(xié)同對誘導原代細胞凋亡的作用.結(jié)論: ①中藥華蟾素體外具有抑制U937細胞株增殖的作用,該作用呈一定的時間-劑量相關性;②