華蟾素誘導(dǎo)急性單核細(xì)胞白血病凋亡的體外研究.pdf

1、目的: 研究(體外)中藥華蟾素對(duì)急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株U937增殖的抑制作用,及其誘導(dǎo)U937細(xì)胞株凋亡的作用,并初步探討其可能的機(jī)制.進(jìn)一步研究華蟾素協(xié)同拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑(etoposide,VP16)對(duì)急性單核細(xì)胞白血病原代細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用,從而為臨床應(yīng)用華蟾素提供體外實(shí)驗(yàn)的證據(jù).方法: ①通過(guò)MTT比色分析華蟾素對(duì)U937增殖的抑制作用,通過(guò)概率單位回歸分析計(jì)算華蟾素對(duì)U937細(xì)胞株的半數(shù)致死劑量(IC50);通過(guò)相關(guān)分析證

2、實(shí)該抑制與華蟾素劑量及作用時(shí)間的相關(guān)性;②通過(guò)Wright's染色、Hoechst33258熒光染色觀察凋亡細(xì)胞特征的形態(tài)學(xué)改變;③通過(guò)瓊脂糖(Agarose)凝膠電泳、末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)原位標(biāo)記兩個(gè)特異的方法,檢測(cè)DNA分解片段的產(chǎn)生;④通過(guò)流式細(xì)胞儀的方法定量檢測(cè)磷脂酰絲氨酸(PS)外化的AnnexinVF-FITC陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù);⑤通過(guò)流式細(xì)胞儀的方法,檢測(cè)華蟾素作用后U937細(xì)胞株Bcl-2的表達(dá)量;⑥通過(guò)RT-P

3、CR半定量的方法,檢測(cè)華蟾素作用后U937細(xì)胞株Fas、FasL的表達(dá);⑦通過(guò)ELISA的方法,檢測(cè)華蟾素作用不同時(shí)間內(nèi)U937細(xì)胞株的c-AMP含量,初步探討華蟾素誘導(dǎo)U937凋亡的可能機(jī)制;⑧應(yīng)用上述方法,檢測(cè)華蟾素協(xié)同VP16對(duì)急性單核細(xì)胞白血病患者細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用,通過(guò)2×2析因?qū)嶒?yàn)方差分析的方法,統(tǒng)計(jì)兩藥協(xié)同對(duì)誘導(dǎo)原代細(xì)胞凋亡的作用.結(jié)論: ①中藥華蟾素體外具有抑制U937細(xì)胞株增殖的作用,該作用呈一定的時(shí)間-劑量相關(guān)性;②